| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 前言 | 第11-21页 |
| 1.1 荔枝概述 | 第11-12页 |
| 1.1.1 荔枝的生理学特性和分类 | 第11页 |
| 1.1.2 荔枝的食用价值和经济价值 | 第11-12页 |
| 1.2 荔枝采后生理变化 | 第12-13页 |
| 1.2.1 荔枝果实采后的呼吸变化 | 第12页 |
| 1.2.2 采后荔枝果实品质的变化 | 第12-13页 |
| 1.3 荔枝采后果皮褐变的可能机理 | 第13-15页 |
| 1.3.1 失水褐变 | 第13-14页 |
| 1.3.2 酶促褐变 | 第14页 |
| 1.3.3 花色苷 | 第14-15页 |
| 1.3.4 微生物引起的褐变 | 第15页 |
| 1.4 类甜蛋白的研究进展 | 第15-19页 |
| 1.4.1 TLP的结构与功能之间的关系 | 第15-19页 |
| 1.4.1.1 TLP的三维结构 | 第15-16页 |
| 1.4.1.2 TLP的β-1,3葡聚糖酶活性 | 第16-17页 |
| 1.4.1.3 TLP的分子生物学研究 | 第17-18页 |
| 1.4.1.4 TLP基因在转基因工程中的研究现状 | 第18-19页 |
| 1.6 本研究的目的意义 | 第19-20页 |
| 1.7 技术路线 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-38页 |
| 2.1 材料 | 第21-22页 |
| 2.1.1 试验材料 | 第21页 |
| 2.1.2 实验菌种与载体 | 第21页 |
| 2.1.3 化学试剂 | 第21页 |
| 2.1.4 生化制剂 | 第21页 |
| 2.1.5 分子生物学试剂盒 | 第21-22页 |
| 2.1.6 主要仪器 | 第22页 |
| 2.2 果实处理与取样方法 | 第22-23页 |
| 2.2.1 不同荔枝品种耐贮性比较 | 第22页 |
| 2.2.2 不同处理对妃子笑果实品质的影响 | 第22-23页 |
| 2.2.3 低温处理对不同耐贮性品种品质的影响 | 第23页 |
| 2.2.4 炭疽侵染处理 | 第23页 |
| 2.2.5 果实发育动态观察 | 第23页 |
| 2.3 采后生理指标测定 | 第23-25页 |
| 2.3.1 果皮褐变指数 | 第23-24页 |
| 2.3.2 果实失重率测定 | 第24页 |
| 2.3.3 果皮失水率测定 | 第24页 |
| 2.3.4 果皮PH值 | 第24页 |
| 2.3.5 果皮相对电导率的测定 | 第24页 |
| 2.3.6 丙二醛(MDA)含量的测定 | 第24-25页 |
| 2.3.7 果皮花色苷的测定 | 第25页 |
| 2.4 类甜蛋白LTLP克隆与表达分析 | 第25-38页 |
| 2.4.1 核酸提取 | 第25-26页 |
| 2.4.1.1 荔枝基因组DNA的提取(改良CTAB法) | 第25页 |
| 2.4.1.2 荔枝不同器官总RNA提取(改良CTAB法) | 第25-26页 |
| 2.4.2 cDNA第一链的合成 | 第26-27页 |
| 2.4.3 荔枝LTLP-cDNA克隆 | 第27-30页 |
| 2.4.3.1 引物设计 | 第27页 |
| 2.4.3.2 反应体系 | 第27页 |
| 2.4.3.3 反应程序 | 第27页 |
| 2.4.3.4 目的片段的回收 | 第27-28页 |
| 2.4.3.5 回收产物与pMD18-T vector连接(参照TaKaRa说明书) | 第28页 |
| 2.4.3.6 E.coli DH5α感受态细胞的制备 | 第28页 |
| 2.4.3.7 连接产物转化E.coli DH5α | 第28-29页 |
| 2.4.3.8 重组质粒DNA的小量提取 | 第29页 |
| 2.4.3.9 重组质粒的PCR和酶切鉴定及测序 | 第29-30页 |
| 2.4.4 荔枝LTLP-DNA克隆 | 第30页 |
| 2.4.4.1 引物设计(同2.4.3.1) | 第30页 |
| 2.4.4.2 反应体系 | 第30页 |
| 2.4.4.3 反应程序、目的片段的回收、连接、转化、质粒提取、鉴定 | 第30页 |
| 2.4.5 荔枝LTLP启动子克隆 | 第30-32页 |
| 2.4.5.1 引物设计(参照TAKARA Genome Walking Kit) | 第30页 |
| 2.4.5.2 体系和反应程序 | 第30-32页 |
| 2.4.5.2.1 第一轮PCR反应 | 第30-31页 |
| 2.4.5.2.2 第二轮PCR反应 | 第31-32页 |
| 2.4.5.2.3 目的片段的回收、连接、转化、质粒提取、鉴定 | 第32页 |
| 2.4.6 Southern blot分析 | 第32-33页 |
| 2.4.7 LTLP植物表达载体的构建 | 第33-35页 |
| 2.4.7.1 引物的设计 | 第33-34页 |
| 2.4.7.2 目的片段的扩增 | 第34页 |
| 2.4.7.3 目的片段的回收 | 第34页 |
| 2.4.7.4 目的片段的酶切 | 第34页 |
| 2.4.7.5 目的片段的再次回收 | 第34页 |
| 2.4.7.6 pCAMBIA1302载体的获得 | 第34页 |
| 2.4.7.7 目的片段和pCAMBIA1302载体的连接 | 第34页 |
| 2.4.7.8 感受态的制备、转化、重组质粒的筛选和鉴定、测序 | 第34-35页 |
| 2.4.8 利用基因枪转化法将pCAMBIA1302-LTLP载体转入洋葱表皮细胞 | 第35页 |
| 2.4.8.1 材料处理 | 第35页 |
| 2.4.8.2 pCAMBIA1302-LTLP和pCAMBIA1302质粒提取 | 第35页 |
| 2.4.8.3 微弹制备(王关林等,2002) | 第35页 |
| 2.4.8.4 基因枪轰击洋葱材料 | 第35页 |
| 2.4.9 荧光定量RT-PCR分析LTLP表达量 | 第35-36页 |
| 2.4.9.1 cDNA第一链的合成 | 第35页 |
| 2.4.9.2 荧光定量PCR的引物设计 | 第35-36页 |
| 2.4.9.3 荧光定量PCR的反应体系和反应程序 | 第36页 |
| 2.4.9.4 荧光定量PCR的定量方法 | 第36页 |
| 2.4.10 启动子缺失载体构建 | 第36-38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-66页 |
| 3.1 不同荔枝品种生理变化的比较 | 第38-40页 |
| 3.1.1 不同品种荔枝果实贮藏过程中褐变指数和好果率的变化 | 第38页 |
| 3.1.2 不同品种荔枝果实贮藏过程中果实失重率测定 | 第38-39页 |
| 3.1.3 不同品种荔枝果实贮藏过程中果皮累计失水率的变化 | 第39页 |
| 3.1.4 不同品种荔枝果实贮藏过程中果皮pH值的变化 | 第39页 |
| 3.1.5 果皮花色苷的变化 | 第39-40页 |
| 3.1.6 不同品种荔枝果实贮藏过程中果皮MDA和相对电导率含量的变化 | 第40页 |
| 3.2 不同贮藏条件下"妃子笑"生理变化的比较 | 第40-42页 |
| 3.2.1 不同贮藏条件下"妃子笑"褐变指数和好果率的变化 | 第40-41页 |
| 3.2.2 不同贮藏条件下"妃子笑"果皮累计失水率的变化 | 第41页 |
| 3.2.3 不同贮藏条件下"妃子笑"果皮pH值的变化 | 第41页 |
| 3.2.4 不同贮藏条件下"妃子笑"果皮花色苷含量的变化 | 第41-42页 |
| 3.2.5 不同贮藏条件下"妃子笑"果皮MDA和相对电导率含量的变化 | 第42页 |
| 3.3 低温对不同耐贮性品种生理变化的影响 | 第42-45页 |
| 3.3.1 低温对不同耐贮性品种褐变指数的影响 | 第42-43页 |
| 3.3.2 低温对不同耐贮性品种果皮累计失水率的影响 | 第43页 |
| 3.3.3 低温对不同耐贮性品种果皮pH的影响 | 第43-44页 |
| 3.3.4 低温对不同耐贮性品种果皮相对电导率影响 | 第44页 |
| 3.3.5 低温对不同耐贮性品种果皮丙二醛含量的影响 | 第44-45页 |
| 3.3.6 低温对不同耐贮性品种果皮花色苷含量的影响 | 第45页 |
| 3.4 LTLP克隆与序列分析 | 第45-47页 |
| 3.5 妃子笑、无核、紫娘喜的CDNA序列比较和GDNA序列比较 | 第47-49页 |
| 3.6 LTLP推导的氨基酸残基序列分析 | 第49-55页 |
| 3.6.1 LTLP推导的氨基酸序列比较与理化性质分析 | 第49-51页 |
| 3.6.2 同源性分析 | 第51-54页 |
| 3.6.3 蛋白质三级结构 | 第54-55页 |
| 3.7 LTLP瞬时表达 | 第55-58页 |
| 3.7.1 LTLP蛋白定位特征 | 第55-57页 |
| 3.7.2 LTLP表达载体的构建 | 第57页 |
| 3.7.3 LTLP表达产物的亚细胞定位 | 第57-58页 |
| 3.8 SOUTHERN BLOT分析 | 第58-59页 |
| 3.9 LTLP启动子克隆和序列分析 | 第59-62页 |
| 3.9.1 LTLP启动子序列生物信息学分析 | 第59-62页 |
| 3.10 启动子缺失载体构建 | 第62-63页 |
| 3.10.1 不同启动子缺失片段的扩增 | 第62页 |
| 3.10.2 PBI-121-启动子重组质粒的验证 | 第62-63页 |
| 3.11 LTLP表达分析 | 第63-66页 |
| 3.11.1 LTLP组织特异性表达分析 | 第63页 |
| 3.11.2 妃子笑动态发育过程中果皮LTLP表达分析 | 第63-64页 |
| 3.11.3 不同贮藏条件下妃子笑果皮中LTLP表达分析 | 第64页 |
| 3.11.4 室温贮藏条件下三个品种果皮中LTLP表达分析 | 第64-65页 |
| 3.11.5 低温贮藏条件下三个品种果皮中LTLP表达分析 | 第65页 |
| 3.11.6 炭疽侵染妃子笑果皮LTLP表达分析 | 第65-66页 |
| 4 讨论 | 第66-70页 |
| 4.1 LTLP序列分析 | 第66-67页 |
| 4.1.1 LTLP基因克隆和分析 | 第66页 |
| 4.1.2 LTLP蛋白定位于细胞内 | 第66页 |
| 4.1.3 LTLP启动子克隆和分析 | 第66-67页 |
| 4.2 荔枝衰老的过程中的生理变化 | 第67页 |
| 4.2.1 不同荔枝品种耐贮性比较 | 第67页 |
| 4.2.2 不同贮藏条件下荔枝生理变化的比较 | 第67页 |
| 4.3 LTLP与荔枝发育衰老的关系 | 第67-70页 |
| 4.3.1 LTLP在荔枝不同器官的差异表达分析 | 第67-68页 |
| 4.3.2 LTLP在荔枝动态发育过程中表达分析 | 第68页 |
| 4.3.3 LTLP与荔枝果皮失水关系 | 第68页 |
| 4.3.4 LTLP表达与低温关系 | 第68-69页 |
| 4.3.5 LTLP表达与病害的关系 | 第69页 |
| 4.3.6 LTLP表达与失水、保湿、低温、病害之间的相互关系 | 第69-70页 |
| 5 结论 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-78页 |
| 附录 | 第78-84页 |
| 致谢 | 第84页 |
