| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-15页 |
| 第一章 引言 | 第15-31页 |
| 1 糖蛋白质组学研究概述 | 第15-17页 |
| ·糖蛋白定义及主要类型 | 第15-16页 |
| ·蛋白糖基化特点及对分析方法的影响 | 第16-17页 |
| ·蛋白质糖基化研究的内容和策略 | 第17页 |
| 2 糖蛋白质组研究技术 | 第17-26页 |
| ·凝胶上糖蛋白研究技术 | 第18页 |
| ·糖蛋白/糖肽的富集 | 第18-22页 |
| ·糖蛋白/糖基化位点的鉴定 | 第22-25页 |
| ·糖链结构的鉴定及含糖量的测定 | 第25-26页 |
| 3 人类相关糖蛋白质组研究进展 | 第26-28页 |
| ·血清、血浆糖蛋白质组研究进展 | 第26页 |
| ·尿糖蛋白质组研究进展 | 第26-27页 |
| ·唾液糖蛋白质组研究进展 | 第27页 |
| ·膜糖蛋白质组研究进展 | 第27页 |
| ·疾病相关糖蛋白质组研究进展 | 第27-28页 |
| 4 流感病毒蛋白糖基化研究进展 | 第28页 |
| 5 糖蛋白质组学展望 | 第28-30页 |
| 本论文研究的目的和意义 | 第30-31页 |
| 第二章 肼功能化磁性微粒提取N-糖肽并鉴定N-糖基化位点方法的建立 | 第31-47页 |
| 1 引言 | 第31-32页 |
| 2 实验部分 | 第32-36页 |
| ·试剂与材料 | 第32页 |
| ·实验仪器 | 第32-33页 |
| ·肼功能化磁性微粒的制备 | 第33-34页 |
| ·肼功能化磁粒中肼基团密度的测定 | 第34页 |
| ·肼功能化磁粒的封闭 | 第34页 |
| ·N-糖蛋白的提取 | 第34-35页 |
| ·N-糖肽的提取 | 第35页 |
| ·偶联效率和提取效率的计算 | 第35-36页 |
| ·SDS-PAGE | 第36页 |
| ·质谱分析 | 第36页 |
| ·数据库检索和糖基化位点鉴定 | 第36页 |
| 3 实验结果 | 第36-44页 |
| ·四种肼功能化磁粒制备方法的比较 | 第36-38页 |
| ·封闭缓冲液的选择 | 第38页 |
| ·糖蛋白提取条件的优化 | 第38-39页 |
| ·N-糖蛋白的提取 | 第39页 |
| ·N-糖肽的提取与鉴定 | 第39-44页 |
| 4 讨论 | 第44页 |
| 5 小结 | 第44-47页 |
| 第三章 肝癌患者血清中的糖蛋白差异分析 | 第47-75页 |
| 1 引言 | 第47-48页 |
| 2 实验部分 | 第48-52页 |
| ·试剂与材料 | 第48页 |
| ·实验仪器 | 第48页 |
| ·健康志愿者血清和肝癌患者血清的采集 | 第48-49页 |
| ·血清糖蛋白与酰肼树脂的偶联 | 第49页 |
| ·树脂上糖蛋白的酶解 | 第49页 |
| ·溶液中血清蛋白的酶解 | 第49-50页 |
| ·血清蛋白酶解液中糖肽与酰肼树脂的偶联 | 第50页 |
| ·血清蛋白酶解液中糖链末端唾液酸化N-糖肽与酰肼树脂的偶联 | 第50-51页 |
| ·酰肼树脂上N-糖肽的释放 | 第51页 |
| ·LC-MS/MS分析 | 第51页 |
| ·质谱数据的数据库检索和糖基化位点鉴定 | 第51-52页 |
| ·鉴定N-糖蛋白的GO分析 | 第52页 |
| 3 实验结果 | 第52-71页 |
| ·三种方法提取糖蛋白和糖肽比较 | 第52-64页 |
| ·与Uniprot数据库比对结果 | 第64-65页 |
| ·人血清糖蛋白的GO分析 | 第65-67页 |
| ·肝癌患者血清和健康志愿者血清中糖蛋白种类差异分析 | 第67-69页 |
| ·肝癌患者血清和健康志愿者血清中糖蛋白的功能差异分析 | 第69-71页 |
| 4 讨论 | 第71-73页 |
| 5 小结 | 第73-75页 |
| 第四章 不同年龄和性别人唾液中糖蛋白的比较分析 | 第75-115页 |
| 1 引言 | 第75-76页 |
| 2 实验部分 | 第76-79页 |
| ·试剂与材料 | 第76页 |
| ·实验仪器 | 第76页 |
| ·健康志愿者全唾液的采集 | 第76-77页 |
| ·唾液蛋白定量和SDS-PAGE电泳验证 | 第77页 |
| ·唾液蛋白的溶液内酶解 | 第77-78页 |
| ·酰肼树脂提取唾液N-糖肽 | 第78页 |
| ·亲水方法提取唾液N-糖肽 | 第78页 |
| ·LC-MS/MS分析 | 第78-79页 |
| ·质谱数据的数据库检索和糖基化位点鉴定 | 第79页 |
| ·鉴定糖蛋白的生物信息学分析 | 第79页 |
| 3 实验结果 | 第79-110页 |
| ·各年龄段混合唾液中的蛋白质含量和分布 | 第79-81页 |
| ·两种N-糖肽提取方法的比较 | 第81-91页 |
| ·人唾液糖蛋白的GO分析 | 第91页 |
| ·与 Uniprot数据库比对结果 | 第91-93页 |
| ·鉴定到的唾液N-糖蛋白和N-糖肽的分子量和等电点分布 | 第93-94页 |
| ·不同性别和年龄段人唾液中糖蛋白种类差异分析 | 第94-96页 |
| ·相同性别不同年龄段人唾液糖蛋白的功能差异分析 | 第96-99页 |
| ·相同年龄段不同性别人唾液糖蛋白的功能差异分析 | 第99-103页 |
| ·人唾液中糖蛋白相关免疫通路 | 第103-106页 |
| ·人血和全唾液中糖蛋白异同 | 第106-110页 |
| 4 讨论 | 第110-112页 |
| 5 小结 | 第112-115页 |
| 第五章 甲型H1N1流感病毒进化过程中的蛋白糖基化位点变异分析 | 第115-145页 |
| 1 引言 | 第115-117页 |
| 2 实验部分 | 第117-118页 |
| ·实验材料 | 第117页 |
| ·潜在N-糖基化位点的预测和保守性分析 | 第117-118页 |
| ·同源建模和蛋白糖基化的计算机模拟 | 第118页 |
| 3 实验结果 | 第118-138页 |
| ·Sequon Finder软件介绍 | 第118-119页 |
| ·人爆发性和流行性H1N1流感病毒中HA和NA上潜在糖基化位点的比较 | 第119-120页 |
| ·人流行性H1N1流感病毒进化过程中HA和NA上潜在糖基化位点数量的改变 | 第120-123页 |
| ·人流行性H1N1流感病毒中HA和NA上潜在糖基化位点的保守性 | 第123-125页 |
| ·同源建模和蛋白糖基化的计算机模拟 | 第125-128页 |
| ·人流行性H1N1流感病毒进化过程中HA和NA上潜在糖基化位点位置的改变 | 第128-132页 |
| ·人感染的猪H1N1流感病毒中HA和NA上潜在糖基化位点的模式 | 第132-137页 |
| ·其他源性H1N1流感病毒进化过程中HA和NA上潜在糖基化位点的模式 | 第137-138页 |
| 4 讨论 | 第138-143页 |
| ·分析方法的选择 | 第138-140页 |
| ·人流行性H1N1流感病毒进化过程中蛋白糖基化的两种改变方式 | 第140页 |
| ·人流行性H1N1流感病毒进化过程中蛋白糖基化的保守性和功能 | 第140-141页 |
| ·蛋白糖基化位点改变在人流行性H1 N1流感病毒进化过程中的可能生物学功能 | 第141-142页 |
| ·不同宿主中H1N1流感病毒中具有不同的糖基化位点进化模式 | 第142-143页 |
| ·蛋白糖基化对流感病毒疫苗生产和药物设计的影响 | 第143页 |
| 5 小结 | 第143-145页 |
| 全文总结 | 第145-146页 |
| 参考文献 | 第146-159页 |
| 攻读博士期间的研究成果 | 第159-161页 |
| 致谢 | 第161-162页 |
| 作者简介 | 第162页 |
