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柞蚕脂肪酶及热休克蛋白基因的克隆及其免疫相关性研究

摘要第10-11页
英文摘要第11-12页
第一章 昆虫免疫及相关功能基因研究进展第13-22页
    1.1 昆虫的免疫第13-18页
        1.1.1 昆虫的细胞免疫第14页
        1.1.2 昆虫的体液免疫第14-15页
        1.1.3 昆虫的模式识别受体第15-17页
        1.1.4 JAK/STAT途径第17-18页
        1.1.5 Toll途径和Imd途径第18页
    1.2 昆虫脂肪酶及其基因研究进展第18-20页
    1.3 HSP70蛋白的概述第20-21页
        1.3.1 热休克蛋白的分类第20页
        1.3.2 热休克蛋白HSP70的生物学功能第20-21页
    1.4 本课题研究的意义第21-22页
第二章 柞蚕脂肪酶基因的克隆与序列分析第22-35页
    2.1 材料第22-23页
        2.1.1 试验材料第22页
        2.1.2 试验试剂第22-23页
        2.1.3 主要仪器设备第23页
    2.2 试验方法第23-27页
        2.2.1 柞蚕总RNA的提取及mRNA的纯化第23-24页
        2.2.2 柞蚕cDNA第一条链的合成第24-25页
        2.2.3 柞蚕脂肪酶基因PCR扩增第25-26页
        2.2.4 PCR产物目的条带的回收与纯化第26页
        2.2.5 感受态细胞的制备第26页
        2.2.6 PCR产物的链接转化第26-27页
        2.2.7 序列分析第27页
        2.2.8 系统进化的分析第27页
    2.3 结果与分析第27-34页
        2.3.1 柞蚕幼虫RNA提取和RNA质量的检测第27-28页
        2.3.2 克隆产物的检测第28-29页
        2.3.3 柞蚕脂肪酶基因的序列分析第29-33页
        2.3.4 柞蚕脂肪酶基因Aplipase基因进化分析第33-34页
    2.4 讨论第34-35页
第三章 柞蚕感染外源物后脂肪酶基因的表达谱分析第35-44页
    3.1 材料与试剂第35-36页
        3.1.1 试验材料第35页
        3.1.2 病原物诱导后柞蚕各龄期及组织的cDNA制备第35页
        3.1.3 试验仪器设备第35-36页
    3.2 试验方法第36-38页
        3.2.1 柞蚕不同发育时期和组织cDNA的制备第36页
        3.2.2 外源病原物对4龄3天柞蚕幼虫的诱导第36-37页
        3.2.3 柞蚕各龄期、组织以及柞蚕幼虫受不同病原物诱导后中肠组织的cDNA制备第37页
        3.2.4 半定量RT-PCR方法检测柞蚕脂肪酶基因Aplipase的表达谱分析第37页
        3.2.5 外源病原物诱导后柞蚕中肠Aplipase基因的实时定量PCR检测分析第37-38页
    3.3 结果与分析第38-42页
        3.3.1 柞蚕脂肪酶基因Aplipase组织表达谱分析第38-39页
        3.3.2 Real-time PCR引物特异性分析第39-40页
        3.3.3 外源病原物诱导后柞蚕中肠脂肪酶基因的Real-time PCR检测第40-42页
    3.4 讨论第42-44页
第四章 柞蚕热休克蛋白基因HSP70克隆及序列分析第44-52页
    4.1 材料第44页
        4.1.1 试验材料第44页
        4.1.2 试验试剂第44页
        4.1.3 主要仪器设备第44页
    4.2 试验方法第44-45页
        4.2.1 柞蚕蛹总RNA的提取及mRNA的纯化第44页
        4.2.3 柞蚕热休克蛋白HSP70基因的PCR扩增第44-45页
        4.2.4 PCR产物胶回收和连接转化第45页
        4.2.5 目的基因序列分析与蛋白质结构预测第45页
        4.2.6 系统进化分析第45页
    4.3 结果与分析第45-50页
        4.3.1 柞蚕蛹总RNA的电泳检测第45-46页
        4.3.2 柞蚕热休克蛋白基因的序列分析第46-48页
        4.3.3 ApHSP70和ApHSC70蛋白的序列比对及系统进化分析第48-50页
    4.4 讨论第50-52页
第五章 热激处理后热休克蛋白基因的半定量和实时荧光定量检测第52-57页
    5.1 试验材料第52页
        5.1.1 试验材料第52页
        5.1.2 试验试剂第52页
        5.1.3 主要仪器设备第52页
    5.2 试验方法第52-54页
        5.2.1 热激处理柞蚕蛹各组织的RNA提取第52页
        5.2.2 半定量RT-PCR方法检测热激条件下柞蚕蛹各组织中热休克蛋白基因HSP70表达变化第52-53页
        5.2.3 实时定量PCR检测热激处理后柞蚕蛹脂肪体组织中HSP70基因的表达量变化第53-54页
    5.3 结果分析第54-55页
    5.4 讨论第55-57页
第六章 讨论与结论第57-59页
    6.1 讨论第57-58页
    6.2 结论第58-59页
参考文献第59-65页
致谢第65-66页
攻读学位论文期间发表文章第66页

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