| 摘要 | 第8-9页 |
| 英文摘要 | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第11-17页 |
| 1.1 乳酸杆菌表达系统的研究进展 | 第11-12页 |
| 1.2 产气荚膜梭菌及其毒素研究进展 | 第12-14页 |
| 1.2.1 α毒素 | 第12-13页 |
| 1.2.2 β毒素 | 第13-14页 |
| 1.2.3 ε毒素 | 第14页 |
| 1.3 Linker研究进展 | 第14-16页 |
| 1.3.1 基因融合技术 | 第14-15页 |
| 1.3.2 Linker的选择原则与功能 | 第15页 |
| 1.3.3 linker的类型 | 第15-16页 |
| 1.4 绿色荧光蛋白研究进展 | 第16页 |
| 1.5 研究目的和意义 | 第16-17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-30页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-19页 |
| 2.1.1 质粒和菌种 | 第17页 |
| 2.1.2 引物 | 第17页 |
| 2.1.3 生化试剂及试剂盒 | 第17-18页 |
| 2.1.4 抗体 | 第18页 |
| 2.1.5 主要实验仪器与设备 | 第18-19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-30页 |
| 2.2.1 重组质粒pPG-E-α-β2-ε-β1 的构建 | 第19-23页 |
| 2.2.2 重组质粒pPG-E-α-β2-ε-β1 在乳酸杆菌中遗传稳定性分析 | 第23-25页 |
| 2.2.3 重组质粒pPG-E-α-β2-ε-β1’的构建 | 第25-28页 |
| 2.2.4 重组质粒pPG-E-α-β2-ε-β1’在乳酸杆菌中遗传稳定性分析 | 第28页 |
| 2.2.5 重组乳酸杆菌pPG-E-α-β2-ε-β1’/ L.casei 393的蛋白表达及鉴定 | 第28-30页 |
| 3 结果 | 第30-41页 |
| 3.1 重组质粒PPG-E-α-β2-ε-β1 的构建 | 第30-32页 |
| 3.1.1 重组质粒pMD19-T-α-β2-ε-β1 酶切鉴定结果 | 第30页 |
| 3.1.2 重组质粒pPG-α-β2-ε-β1 的鉴定结果 | 第30-31页 |
| 3.1.3 重组质粒pMD19-T-EGFP的鉴定结果 | 第31页 |
| 3.1.4 重组质粒pPG-E-α-β2-ε-β1 的酶切鉴定结果 | 第31-32页 |
| 3.2 重组质粒PPG-E-α-β2-ε-β1 遗传稳定性鉴定 | 第32-35页 |
| 3.2.1 阳性重组乳酸杆菌中pPG-E-α-β2-ε-β1 的鉴定结果 | 第32-33页 |
| 3.2.2 大肠杆菌pPG-E-α-β2-ε-β1/TG1连续传代PCR鉴定结果 | 第33页 |
| 3.2.3 乳酸杆菌pPG-E-α-β2-ε-β1/L.casei 393连续传代PCR鉴定结果 | 第33-34页 |
| 3.2.4 乳酸杆菌pPG-E-α-β2-ε-β1/L.casei 393连续传代酶切鉴定结果 | 第34-35页 |
| 3.2.5 重组质粒pPG-E-α-β2-ε-β1 遗传稳定性测序结果 | 第35页 |
| 3.3 重组质粒PPG-E-α-β2-ε-β1’的构建结果 | 第35-38页 |
| 3.3.1 质粒pMD19-T-α-β2、pMD19-T- ε、pMD19-T-β1 酶切鉴定结果 | 第35-36页 |
| 3.3.2 重组质粒pMD19-T-α-β2-ε 酶切鉴定结果 | 第36页 |
| 3.3.3 重组质粒pMD19-T-α-β2-ε-β1’酶切鉴定结果 | 第36-37页 |
| 3.3.4 重组质粒pPG-α-β2-ε-β1’酶切鉴定结果 | 第37页 |
| 3.3.5 重组质粒pPG-E-α-β2-ε-β1’酶切鉴定结果 | 第37-38页 |
| 3.4 重组乳酸杆菌PPG-E-α-β2-ε-β1’/L.casei 393遗传稳定性鉴定 | 第38-39页 |
| 3.4.1 重组乳酸杆菌pPG-E-α-β2-ε-β1’/L.casei 393 PCR鉴定结果 | 第38页 |
| 3.4.2 重组乳酸杆菌pPG-E-α-β2-ε-β1’/L.casei 393酶切鉴定结果 | 第38-39页 |
| 3.4.3 重组质粒pPG-E-α-β2-ε-β1’遗传稳定性测序结果 | 第39页 |
| 3.5 重组乳酸杆菌PPG-E-α-β2-ε-β1’/L.casei 393蛋白表达及鉴定 | 第39-41页 |
| 3.5.1 激光共聚焦显微镜检测结果 | 第39-40页 |
| 3.5.2 Western blot鉴定结果 | 第40-41页 |
| 4 讨论 | 第41-45页 |
| 4.1 不同Linker对外源基因遗传的稳定性影响 | 第41页 |
| 4.2 EGFP基因作为报告基因的优点及其应用 | 第41-42页 |
| 4.3 乳酸杆菌感受态制备及电转化分析 | 第42页 |
| 4.4 重组质粒PPG-E-α-β2-ε-β1 在不同菌中的遗传稳定性 | 第42-45页 |
| 5 结论 | 第45-46页 |
| 致谢 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-52页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第52页 |
