| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 引言 | 第12-18页 |
| 1.实验材料 | 第18-22页 |
| 1.1.酶制品及分子量Marker | 第18页 |
| 1.1.1.核酸限制性内切酶 | 第18页 |
| 1.1.2.其它酶制品 | 第18页 |
| 1.1.3.DNA分子量标准 | 第18页 |
| 1.1.4.蛋白分子量标准 | 第18页 |
| 1.2.主要生化试剂 | 第18页 |
| 1.3.培养基、抗生素和血清 | 第18-19页 |
| 1.4.实验所用试剂盒 | 第19页 |
| 1.5.菌株 | 第19页 |
| 1.6.质粒 | 第19页 |
| 1.7.细胞系 | 第19页 |
| 1.8.生物信息学分析软件 | 第19-20页 |
| 1.9.主要仪器及设备 | 第20页 |
| 1.10.PCR引物 | 第20-22页 |
| 2.实验方法 | 第22-34页 |
| 2.1.主要试剂及其配制方法 | 第22-23页 |
| 2.1.1.细胞培养所用试剂 | 第22页 |
| 2.1.2.细菌培养所用的试剂 | 第22页 |
| 2.1.3.琼脂糖凝胶电泳所用试剂的配制 | 第22-23页 |
| 2.1.4.Western Blot所用试剂的配制方法 | 第23页 |
| 2.2.细胞实验 | 第23-25页 |
| 2.2.1.细胞系的培养 | 第23-24页 |
| 2.2.2.细胞系的转染 | 第24-25页 |
| 2.3.Real-time PCR | 第25-27页 |
| 2.3.1.TRIZOl法提取细胞中总RNA | 第25页 |
| 2.3.2.RNA质量的检测 | 第25页 |
| 2.3.3.mRNA cDNA第一链的合成 | 第25-26页 |
| 2.3.4.miRNA的cDNA第一链的合成 | 第26-27页 |
| 2.3.5.mRNA的Real-time PCR | 第27页 |
| 2.3.6.miRNA的Real-time PCR | 第27页 |
| 2.4.重组质粒的构建 | 第27-28页 |
| 2.5.质粒DNA的提取 | 第28-29页 |
| 2.5.1.质粒DNA小量提取及定量 | 第28页 |
| 2.5.2.质粒DNA的大量制备及纯化 | 第28-29页 |
| 2.6.Western blot | 第29-30页 |
| 2.6.1.蛋白的提取和定量 | 第29-30页 |
| 2.6.2.蛋白的SDS-PAGE电泳 | 第30页 |
| 2.6.3.蛋白的电转移 | 第30页 |
| 2.6.4.杂交 | 第30页 |
| 2.7.RNA-IP实验 | 第30-32页 |
| 2.7.1.制备抗体包被的protein A | 第30-31页 |
| 2.7.2.细胞的裂解 | 第31-32页 |
| 2.8.统计分析 | 第32-34页 |
| 3.实验结果 | 第34-44页 |
| 3.1.荧光分析实验所用重组质粒的构建 | 第34-36页 |
| 3.1.1.RT-PCR扩增目的基因pri-miR-150 | 第34-35页 |
| 3.1.2.重组质粒的酶切鉴定 | 第35页 |
| 3.1.3.目的片段的测序鉴定 | 第35-36页 |
| 3.2.KSRP过表达质粒的构建 | 第36-37页 |
| 3.2.1.目的基因KSRP的PCR扩增 | 第36-37页 |
| 3.2.2.KSRP重组质粒的PCR鉴定 | 第37页 |
| 3.3.KSRP对miR-150加工成熟的促进作用 | 第37-40页 |
| 3.3.1.检测KSRP过表达是否成功 | 第37-38页 |
| 3.3.2.KSRP对内源性miRNAs的加工促进作用 | 第38-40页 |
| 3.4.荧光成像实验确定KSRP对miR-150的加工促进作用 | 第40-42页 |
| 3.5.RNA Immunoprecipitation（RNA-IP）实验验证了KSRP和miR-150的结合 | 第42-44页 |
| 4.讨论 | 第44-50页 |
| 5.实验结论 | 第50-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 文献综述 miRNA生物起源的调控机制 | 第58-72页 |
| 参考文献 | 第64-72页 |
| 致谢 | 第72-74页 |
| 攻读硕士期间发表和待发表的学术论文 | 第74-75页 |
