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一种基于细胞技术检测海洋多糖免疫调节活性方法的研究

摘要第4-6页
Abstract第6-7页
第一章 绪论第13-22页
    1.1 多糖第13-15页
        1.1.1 海洋多糖第13页
        1.1.2 海洋动物多糖的生物学活性第13-15页
            1.1.2.1 抗氧化作用第13-14页
            1.1.2.2 免疫调节作用第14页
            1.1.2.3 抗肿瘤作用第14页
            1.1.2.4 抗病毒作用第14页
            1.1.2.5 降血脂作用第14页
            1.1.2.6 其他作用第14-15页
    1.2 海参第15页
    1.3 海参水煮液第15-16页
    1.4 裙带菜孢子叶第16页
    1.5 扇贝裙边第16-17页
    1.6 巨噬细胞系RAW264.7第17页
    1.7 免疫调节概述第17-18页
        1.7.1 一氧化氮(NO)第17页
        1.7.2 前列腺素E_2(PGE_2)第17-18页
        1.7.3 调节吞噬能力第18页
    1.8 氧化应激概述第18页
        1.8.1 活性氧的来源及调控第18页
    1.9 炎症概述第18-20页
        1.9.1 促炎因子TNF-α第19页
        1.9.2 促炎因子IL-1β第19页
        1.9.3 促炎因子IL-6第19页
        1.9.4 一氧化氮合酶第19-20页
        1.9.5 环氧化酶第20页
    1.10 主要研究内容及意义第20-22页
第二章 海参水煮液多糖提取物免疫调节活性的研究第22-46页
    2.1 实验材料第22-24页
        2.1.1 实验原料第22页
        2.1.2 实验仪器第22-23页
        2.1.3 实验试剂第23-24页
    2.2 实验方法第24-30页
        2.2.1 细胞培养及预处理第24-25页
        2.2.2 PESCPL体外免疫调节活性的测定第25-26页
            2.2.2.1 细胞毒性检测第25页
            2.2.2.2 NO释放能力检测第25页
            2.2.2.3 PGE_2释放能力检测第25页
            2.2.2.4 中性红吞噬能力检测第25-26页
            2.2.2.5 iNOS酶活力检测第26页
        2.2.3 PESCPL体外抗氧化活性的测定第26-27页
            2.2.3.1 H_2O_2氧化损伤模型的建立第26页
            2.2.3.2 细胞存活率检测第26页
            2.2.3.3 细胞体系ROS含量检测第26页
            2.2.3.4 MDA含量检测第26-27页
            2.2.3.5 抗氧化酶(SOD、CAT、GSH-Px)酶活力检测第27页
        2.2.4 PESCPL体外抗炎活性的测定第27-30页
            2.2.4.1 促炎因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)水平检测第27页
            2.2.4.2 NO释放能力检测第27页
            2.2.4.3 iNOS酶活力检测第27-28页
            2.2.4.4 免疫印迹法检测COX-2蛋白表达第28-30页
                2.2.4.4.1 考马斯亮蓝G-250法测定蛋白含量第28-29页
                2.2.4.4.2 SDS-PAGE第29页
                2.2.4.4.3 免疫印迹第29-30页
        2.2.5 数据统计第30页
    2.3 结果与讨论第30-44页
        2.3.1 PESCPL体外免疫调节活性第30-35页
            2.3.1.1 PESCPL的细胞毒性第30-31页
            2.3.1.2 PESCPL对RAW264.7细胞NO释放能力的影响第31-32页
            2.3.1.3 PESCPL对RAW264.7细胞PGE_2释放能力的影响第32-33页
            2.3.1.4 PESCPL对RAW264.7细胞吞噬能力的影响第33-34页
            2.3.1.5 PESCPL对RAW264.7细胞内iNOS酶活力的影响第34-35页
        2.3.2 PESCPL体外抗氧化活性第35-40页
            2.3.2.1 H_2O_2氧化损伤的有效浓度第35-36页
            2.3.2.2 PESCPL对经H_2O_2损伤RAW264.7细胞存活率的影响第36-37页
            2.3.2.3 PESCPL对经H_2O_2损伤RAW264.7细胞内ROS含量的影响第37-38页
            2.3.2.4 PESCPL对经H_2O_2损伤RAW264.7细胞内MDA含量及SOD、CAT、GSH-Px酶活力的影响第38-40页
        2.3.3 PESCPL体外抗炎活性第40-44页
            2.3.3.1 PESCPL对经LPS诱导炎症的RAW264.7细胞中促炎因子水平的影响第40-42页
            2.3.3.2 PESCPL对经LPS诱导炎症的RAW264.7细胞NO释放能力及细胞内iNOS活力的影响第42-43页
            2.3.3.3 PESCPL对经LPS诱导炎症的RAW264.7细胞内COX-2表达能力的影响第43-44页
    2.4 本章小结第44-46页
第三章 裙带菜孢子叶多糖提取工艺优化及抗氧化活性研究第46-65页
    3.1 实验材料第46-47页
        3.1.1 实验原料第46页
        3.1.2 实验仪器第46-47页
        3.1.3 实验试剂第47页
    3.2 实验方法第47-50页
        3.2.1 裙带菜孢子叶多糖提取工艺优化第47-49页
            3.2.1.1 裙带菜孢子叶多糖提取工艺流程第48页
            3.2.1.2 多糖测定第48页
            3.2.1.3 多糖得率第48页
            3.2.1.4 裙带菜孢子叶多糖提取单因素实验第48-49页
            3.2.1.5 木瓜蛋白酶提取裙带菜孢子叶多糖的响应面优化试验第49页
        3.2.2 PSUP体外抗氧化活性第49-50页
            3.2.2.1 细胞存活率检测第49页
            3.2.2.2 细胞体系ROS含量检测第49页
            3.2.2.3 MDA含量检测第49-50页
            3.2.2.4 抗氧化酶(SOD、CAT、GSH-Px)酶活力检测第50页
        3.2.3 数据统计第50页
    3.3 结果与讨论第50-64页
        3.3.1 单因素试验第50-57页
            3.3.1.1 过筛目数对裙带菜孢子叶多糖得率的影响第50-51页
            3.3.1.2 浸泡温度对裙带菜孢子叶多糖得率的影响第51页
            3.3.1.3 浸泡时间对裙带菜孢子叶多糖得率的影响第51-52页
            3.3.1.4 液料比对裙带菜孢子叶多糖得率的影响第52-53页
            3.3.1.5 酶解pH对裙带菜孢子叶多糖得率的影响第53-54页
            3.3.1.6 酶解时间对裙带菜孢子叶多糖得率的影响第54页
            3.3.1.7 酶加量对裙带菜孢子叶多糖得率的影响第54-55页
            3.3.1.8 酶解温度对裙带菜孢子叶多糖得率的影响第55-56页
            3.3.1.9 浸提时间对裙带菜孢子叶多糖得率的影响第56-57页
        3.3.2 响应面分析法对裙带菜孢子叶多糖提取工艺的优化第57-60页
            3.3.2.1 响应面试验设计第57-58页
            3.3.2.2 响应面分析第58-59页
            3.3.2.3 各因素交互作用对多糖得率的响应面分析第59-60页
            3.3.2.4 模型验证实验第60页
        3.3.3 PSUP体外抗氧化活性第60-64页
            3.3.3.1 PSUP的细胞毒性及其对经H_2O_2损伤RAW264.7细胞存活率的影响第60-61页
            3.3.3.2 PSUP对经H_2O_2损伤RAW264.7细胞内ROS含量的影响第61-62页
            3.3.3.3 PSUP对经H_2O_2损伤RAW264.7细胞内MDA含量及SOD、CAT、GSH-Px酶活力的影响第62-64页
    3.4 本章小结第64-65页
第四章 扇贝裙边多糖提取物的提取及抗氧化活性研究第65-73页
    4.1 实验材料第65-67页
        4.1.1 实验原料第65页
        4.1.2 实验仪器第65-66页
        4.1.3 实验试剂第66-67页
    4.2 实验方法第67-68页
        4.2.1 扇贝裙边多糖提取物提取工艺流程第67页
        4.2.2 多糖得率测定第67页
            4.2.2.1 裙边多糖提取物蛋白质的脱除(Sevage法)第67页
        4.2.3 抗氧化活性的测定第67-68页
            4.2.3.1 细胞培养第67页
            4.2.3.2 PESS的细胞毒性及其对氧化损伤细胞增殖能力的影响第67页
            4.2.3.3 PESS对氧化损伤细胞内ROS含量的影响第67-68页
            4.2.3.4 PESS对氧化损伤细胞内MDA含量、SOD、CAT及GSH-Px活力的影响第68页
    4.3 数据统计第68页
    4.4 结果与讨论第68-72页
        4.4.1 PESS各组分含量第68页
        4.4.2 PESS的细胞毒性第68-69页
        4.4.3 PESS对氧化损伤细胞存活率的影响第69-70页
        4.4.4 PESS对氧化损伤细胞中ROS含量的影响第70页
        4.4.5 PESS对经H_2O_2损伤RAW264.7细胞内MDA含量及SOD、CAT、GSH-Px酶活力的影响第70-72页
    4.5 本章小结第72-73页
第五章 结论第73-74页
参考文献第74-80页
致谢第80-81页
附录第81页

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