| 摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 缩略语表 | 第9-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-17页 |
| 1.1 昆虫生殖滞育的研究进展 | 第10-11页 |
| 1.2 保幼激素与昆虫生殖滞育 | 第11-13页 |
| 1.2.1 保幼激素在昆虫生殖滞育中的功能 | 第11-12页 |
| 1.2.2 保幼激素受体 | 第12-13页 |
| 1.3 RNAi在昆虫滞育中的研究进展 | 第13-15页 |
| 1.3.1 RNAi机理 | 第13-14页 |
| 1.3.2 RNAi在昆虫滞育中的应用 | 第14-15页 |
| 1.4 大猿叶虫滞育特性及滞育调控机制 | 第15页 |
| 1.5 研究的目的意义 | 第15-16页 |
| 1.6 研究内容和技术路线 | 第16-17页 |
| 1.6.1 研究内容 | 第16-17页 |
| 1.6.1.1 JH对大猿叶虫卵巢发育和脂质累积的影响 | 第16页 |
| 1.6.1.2 大猿叶虫Met基因的全长克隆及序列分析 | 第16页 |
| 1.6.1.3 大猿叶虫Met基因的时间表达模式 | 第16页 |
| 1.6.1.4 大猿叶虫Met基因的RNAi实验 | 第16-17页 |
| 1.6.2 技术路线 | 第17页 |
| 2 实验材料与方法 | 第17-27页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-18页 |
| 2.1.1 供试昆虫 | 第17页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第17-18页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第18页 |
| 2.2 实验方法 | 第18-27页 |
| 2.2.1 大猿叶虫Met1、Met2基因全长克隆 | 第18-22页 |
| 2.2.1.1 总RNA的提取 | 第18-19页 |
| 2.2.1.2 反转录合成cDNA第一链 | 第19页 |
| 2.2.1.3 引物设计 | 第19-20页 |
| 2.2.1.4 PCR反应扩增Met1、Met2基因片段 | 第20-21页 |
| 2.2.1.5 目的片段与载体连接 | 第21页 |
| 2.2.1.6 转化 | 第21页 |
| 2.2.1.7 重组质粒鉴定和测序 | 第21-22页 |
| 2.2.1.8 序列分析 | 第22页 |
| 2.2.2 实时荧光定量PCR反应 | 第22-23页 |
| 2.2.3 外源JHA的注射与表型分析 | 第23页 |
| 2.2.3.1 外源JHA的注射 | 第23页 |
| 2.2.3.2 表型分析 | 第23页 |
| 2.2.4 Met的RNAi实验 | 第23-25页 |
| 2.2.4.1 干扰引物的设计 | 第23-24页 |
| 2.2.4.2 模板的制备 | 第24-25页 |
| 2.2.4.3 dsRNA的合成 | 第25页 |
| 2.2.4.4 dsRNA的纯化 | 第25页 |
| 2.2.5 dsRNA的注射 | 第25-26页 |
| 2.2.6 RNAi后的分子检测 | 第26页 |
| 2.2.7 脂肪体的油红O染色实验 | 第26页 |
| 2.2.8 甘油三酯含量的测定 | 第26-27页 |
| 2.3 数据分析 | 第27页 |
| 3 结果与分析 | 第27-45页 |
| 3.1 JH对大猿叶虫卵巢发育和脂质积累的影响 | 第27-31页 |
| 3.1.1 JH对卵巢发育的影响 | 第27页 |
| 3.1.2 JH对脂质积累的影响 | 第27-30页 |
| 3.1.3 JH对Vg基因转录的影响 | 第30-31页 |
| 3.2 大猿叶虫Met基因的克隆和序列分析 | 第31-34页 |
| 3.2.1 大猿叶虫Met基因的全长克隆 | 第31-33页 |
| 3.2.2 大猿叶虫Met基因的序列分析 | 第33-34页 |
| 3.3 Met在大猿叶虫不同取食时间的表达模式 | 第34-35页 |
| 3.4 Met基因dsRNA的合成 | 第35-36页 |
| 3.5 干扰Met对大猿叶虫生殖的影响 | 第36-40页 |
| 3.5.1 干扰Met对卵巢发育的影响 | 第36-38页 |
| 3.5.2 干扰Met对Vg转录的影响 | 第38-40页 |
| 3.6 干扰Met对大猿叶虫滞育的影响 | 第40-45页 |
| 3.6.1 干扰Met对脂质累积的影响 | 第40-43页 |
| 3.6.2 干扰Met对抗逆基因转录的影响 | 第43-45页 |
| 4 结论与讨论 | 第45-50页 |
| 4.1 结论 | 第45-46页 |
| 4.1.1 JH对大猿叶虫卵巢发育和脂质累积的影响 | 第45页 |
| 4.1.2 Met基因的克隆和与序列分析 | 第45页 |
| 4.1.3 Met在大猿叶虫生殖和滞育中的功能 | 第45-46页 |
| 4.2 讨论 | 第46-50页 |
| 4.2.1 两种Met基因的功能结构分析 | 第46页 |
| 4.2.2 JH-Met信号传导途径促进生殖但抑制滞育 | 第46-48页 |
| 4.2.3 Met可能并非JH的唯一受体 | 第48-50页 |
| 参考文献 | 第50-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 附录 | 第60页 |
