| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 1 文献综述 | 第9-14页 |
| 1.1 B环5'-羟基化类黄酮的类型及功能 | 第9-10页 |
| 1.1.1 B环5'-羟基化类黄酮类型 | 第9页 |
| 1.1.2 B环5'-羟基化类黄酮在植物体内的功能 | 第9-10页 |
| 1.1.3 B环5'羟基化类黄酮的医学意义 | 第10页 |
| 1.2 F3'5'H是类黄酮B环5'羟基化反应唯一酶系 | 第10-11页 |
| 1.3 F3'5'H功能分析的研究进展 | 第11-12页 |
| 1.3.1 F3'5'H酶在转基因植物中的研究 | 第11-12页 |
| 1.3.2 F3'5'H酶在酵母真核表达体系中的研究 | 第12页 |
| 1.4 异源表达中密码子优化的应用 | 第12-13页 |
| 1.5 异源表达中信号肽分析的应用 | 第13-14页 |
| 2 引言 | 第14-16页 |
| 2.1 研究目的及意义 | 第14-15页 |
| 2.2 研究的主要内容 | 第15-16页 |
| 3 材料和方法 | 第16-25页 |
| 3.1 实验材料 | 第16页 |
| 3.2 仪器与试剂 | 第16-17页 |
| 3.2.1 药品和试剂 | 第16页 |
| 3.2.2 主要仪器 | 第16页 |
| 3.2.3 茶树粗酶液提取 | 第16-17页 |
| 3.2.4 酿酒酵母培养及诱导 | 第17页 |
| 3.3 实验方法 | 第17-25页 |
| 3.3.1 CsF3'5'H基因生物信息学分析 | 第17-18页 |
| 3.3.2 茶树粗酶液中F3'5'H酶体外活性检测 | 第18-19页 |
| 3.3.3 茶树幼苗的不同诱导处理 | 第19页 |
| 3.3.4 转CsF3'5'H基因烟草异源表达 | 第19页 |
| 3.3.5 转基因烟草花花青素测定方法 | 第19-20页 |
| 3.3.6 茶树及转基因烟草表达特异性分析 | 第20-21页 |
| 3.3.7 真核表达 | 第21-25页 |
| 4 结果与分析 | 第25-38页 |
| 4.1 茶树F3'5'H克隆及生物信息学分析 | 第25-28页 |
| 4.1.1 茶树F3'5'H基因启动子克隆及序列顺式作用元件分析 | 第25-26页 |
| 4.1.2 信号肽分析 | 第26-27页 |
| 4.1.3 CsF3'5,H进化树分析 | 第27-28页 |
| 4.2 茶树F3'5'H基因的功能验证 | 第28-30页 |
| 4.2.1 茶树不同组织CsF3'5'H基因的表达差异 | 第28-29页 |
| 4.2.2 不同诱导条件下茶苗中的F3'5'H表达差异 | 第29页 |
| 4.2.3 茶树叶片中F3'5'H酶的活性检测 | 第29-30页 |
| 4.3 利用烟草遗传转化体系验证CsF3'5'H的表达 | 第30-33页 |
| 4.3.1 转基因烟草实时荧光定量PCR分析 | 第30-32页 |
| 4.3.2 转烟草中部分花青素分析 | 第32-33页 |
| 4.4 CsF3'5'H在酵母中的异源表达 | 第33-38页 |
| 4.4.1 CzyF3'5'H真核表达质粒的构建 | 第33页 |
| 4.4.2 在酵母表达中CsF3'5'H基因的优化策略 | 第33-34页 |
| 4.4.3 转基因酿酒酵母酶活表达 | 第34-38页 |
| 4.4.3.1 CsF3'5'H及yF3'5'H的酶活表达 | 第34页 |
| 4.4.3.2 优化重组序列CzyF3'5'H的酶活表达 | 第34-35页 |
| 4.4.3.3 CzyF3'5'H1、VvF3'5'H对不同底物的酶活表达 | 第35-38页 |
| 5 讨论 | 第38-40页 |
| 5.1 CsF3'5'H在茶树儿茶素合成中的作用 | 第38页 |
| 5.2 CsF3'5'H转基因烟草中花青素的积累 | 第38-39页 |
| 5.3 CsF3'5'H在酿酒酵母中的异源表达 | 第39-40页 |
| 6 结论 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-46页 |
| 附录 | 第46-51页 |
| 附表1 PCR引物 | 第46-48页 |
| 附表2 CsF3'5'H启动子顺式作用元件分析 | 第48-50页 |
| 附图 转基因酵母酶活产物的二级质谱图 | 第50-51页 |
| 英文缩写及注释 | 第51-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 个人简介及成果 | 第53页 |
