| 摘要 | 第5-6页 |
| abstract | 第6页 |
| 英文缩略表 | 第10-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-19页 |
| 1.1 口蹄疫 | 第12页 |
| 1.2 口蹄疫核酸疫苗研究进展 | 第12-13页 |
| 1.3 黏膜免疫 | 第13-14页 |
| 1.4 佐剂在黏膜疫苗研究中的应用 | 第14-17页 |
| 1.4.1 黏膜刺激因子 | 第14-16页 |
| 1.4.2 黏膜呈递系统 | 第16-17页 |
| 1.5 总结与展望 | 第17-19页 |
| 第二章 口蹄疫病毒真核表达质粒的构建及在BHK-21 细胞中的表达 | 第19-31页 |
| 2.1 材料 | 第19-20页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第19页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第19页 |
| 2.1.3 实验主要试剂配置 | 第19-20页 |
| 2.2 方法 | 第20-26页 |
| 2.2.1 克隆引物的设计与合成 | 第20页 |
| 2.2.2 RNA的提取 | 第20-21页 |
| 2.2.3 RT-PCR | 第21页 |
| 2.2.4 PCR产物凝胶回收 | 第21页 |
| 2.2.5 重组克隆载体的构建 | 第21-23页 |
| 2.2.6 重组真核表达载体的构建 | 第23-25页 |
| 2.2.7 重组真核表达质粒的鉴定 | 第25页 |
| 2.2.8 重组质粒的表达及鉴定 | 第25-26页 |
| 2.3 结果 | 第26-30页 |
| 2.3.1 重组表达质粒pP12A3C/IFN的鉴定 | 第26-28页 |
| 2.3.2 重组表达质粒pP12A3C/IFN的序列分析 | 第28页 |
| 2.3.3 重组表达质粒的表达与鉴定结果 | 第28-30页 |
| 2.4 讨论 | 第30-31页 |
| 第三章 载口蹄疫核酸疫苗纳米微球的制备 | 第31-38页 |
| 3.1 材料 | 第31页 |
| 3.1.1 主要试剂与仪器 | 第31页 |
| 3.1.2 大量提取质粒 | 第31页 |
| 3.2 三种纳米微球的制备 | 第31-32页 |
| 3.2.1 DNA-CS/PLGA-NPs的制备 | 第31-32页 |
| 3.2.2 CpG-CS/PLGA-NPs的制备 | 第32页 |
| 3.2.3 pP12A3C/IFN-Am/MS-NPs的制备 | 第32页 |
| 3.3 三种纳米微球理化特性的检测 | 第32-33页 |
| 3.3.1 扫描电镜的观察 | 第32页 |
| 3.3.2 CS/PLGA-NPs对DNA吸附与释放率的测定 | 第32-33页 |
| 3.3.3 Am/MS-NPs对DNA的吸附率与释放率测定 | 第33页 |
| 3.4 结果 | 第33-36页 |
| 3.4.1 扫描电镜结果 | 第33-34页 |
| 3.4.2 CS/PLGA-NPs对DNA吸附率与释放率测定结果 | 第34-35页 |
| 3.4.3 Am/MS-NPs对DNA的吸附率与释放率测定结果 | 第35-36页 |
| 3.5 讨论 | 第36-38页 |
| 第四章 载口蹄疫核酸疫苗纳米微球对豚鼠黏膜免疫的效果研究 | 第38-49页 |
| 4.1 材料 | 第38页 |
| 4.1.1 实验动物 | 第38页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第38页 |
| 4.2 方法 | 第38-41页 |
| 4.2.1 豚鼠分组及免疫 | 第38-39页 |
| 4.2.2 黏膜样品中sIgA的检测 | 第39页 |
| 4.2.3 血液中IgG的检测 | 第39-40页 |
| 4.2.4 豚鼠血清中和抗体测定 | 第40页 |
| 4.2.5 T淋巴细胞亚群CD4+、CD8+的检测 | 第40页 |
| 4.2.6 脾淋巴细胞增殖试验 | 第40-41页 |
| 4.2.7 动物攻毒保护试验 | 第41页 |
| 4.3 结果 | 第41-47页 |
| 4.3.1 黏膜样品中sIgA的检测结果 | 第41-42页 |
| 4.3.2 血液中IgG的检测结果 | 第42-43页 |
| 4.3.3 T淋巴细胞亚群CD4+、CD8+的检测结果 | 第43-45页 |
| 4.3.4 脾淋巴细胞增殖试验结果 | 第45页 |
| 4.3.5 中和抗体的检测结果 | 第45-46页 |
| 4.3.6 攻毒保护实验结果 | 第46-47页 |
| 4.4 讨论 | 第47-49页 |
| 第五章 全文结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-56页 |
| 附录 | 第56-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 作者简历 | 第64页 |
