| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-14页 |
| 缩略语 | 第14-15页 |
| 第一部分 文献综述与实验设计 | 第15-26页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-25页 |
| 1. 蛋白质的折叠 | 第16-17页 |
| ·影响蛋白质正确折叠的因素 | 第16页 |
| ·分子伴侣促进蛋白质的正确折叠 | 第16-17页 |
| 2. 丰富多样的热激蛋白 | 第17-24页 |
| ·热激蛋白的分类 | 第17-18页 |
| ·小热激蛋白 | 第18-24页 |
| ·小热激蛋白的结构特征 | 第18-21页 |
| ·小热激蛋白的分子伴侣活性及其机制 | 第21-23页 |
| ·小热激蛋白的主要功能和生物应用 | 第23-24页 |
| 3. 小热激蛋白sHsp19.9 的研究进展 | 第24-25页 |
| 第二章 实验设计方案 | 第25-26页 |
| 1. 实验目的和意义 | 第25页 |
| 2. 研究内容 | 第25-26页 |
| 第二部分 研究论文 | 第26-77页 |
| 第一章 生物信息学分析 | 第27-32页 |
| 1. 序列与工具 | 第27页 |
| ·序列 | 第27页 |
| ·工具和软件 | 第27页 |
| 2. 方法 | 第27-28页 |
| 3. 结果 | 第28-30页 |
| ·sHsp19.9 蛋白的序列分析 | 第28页 |
| ·sHsp19.9 蛋白的保守结构域分析 | 第28-29页 |
| ·sHsp19.9 蛋白的疏水性分析 | 第29页 |
| ·sHsp19.9 蛋白的信号肽分析 | 第29-30页 |
| ·sHsp19.9 蛋白的同源性分析 | 第30页 |
| 4. 讨论 | 第30-32页 |
| 第二章 家蚕sHsp19.9 基因的原核表达 | 第32-41页 |
| 1. 材料与试剂 | 第32-34页 |
| ·材料 | 第32页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第32页 |
| ·自配试剂 | 第32-34页 |
| 2. 方法 | 第34-38页 |
| ·家蚕sHsp19.9 基因的克隆 | 第34-37页 |
| ·PCR 扩增sHsp19.9 基因 | 第34-35页 |
| ·凝胶回收、纯化PCR 扩增产物 | 第35页 |
| ·PCR 扩增产物与pET-28a 载体双酶切与回收 | 第35页 |
| ·连接反应 | 第35页 |
| ·CaC1_2 法制备E.coli TG1 感受态细胞 | 第35-36页 |
| ·连接产物的转化 | 第36页 |
| ·重组质粒的筛选与鉴定 | 第36-37页 |
| ·家蚕sHsp19.9 基因的表达 | 第37-38页 |
| ·CaC1_2 法制备E.coli BL21-star 感受态细胞 | 第37页 |
| ·重组质粒的筛选与测序鉴定 | 第37页 |
| ·融合蛋白sHsp19.9-FL 在大肠杆菌中的表达 | 第37-38页 |
| ·蛋白凝胶电泳检测 | 第38页 |
| 3. 结果 | 第38-40页 |
| ·PCR 扩增目的基因 | 第38页 |
| ·重组克隆的鉴定 | 第38-39页 |
| ·融合蛋白sHsp19.9-FL 的表达 | 第39-40页 |
| 4. 讨论 | 第40-41页 |
| 第三章 融合蛋白sHsp19.9-FL 的纯化及抗体制备 | 第41-48页 |
| 1. 材料与试剂 | 第41-43页 |
| ·材料 | 第41页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第41页 |
| ·自配试剂 | 第41-43页 |
| 2. 方法 | 第43-45页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第43-44页 |
| ·包涵体的溶解与样品制备 | 第43页 |
| ·Ni-NTA 柱纯化融合蛋白 | 第43-44页 |
| ·抗原的制备 | 第44页 |
| ·抗体的制备 | 第44页 |
| ·抗体的纯化 | 第44页 |
| ·间接ELISA 法测定抗体效价 | 第44-45页 |
| 3. 结果 | 第45-47页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第45-46页 |
| ·间接ELISA 法测定抗体效价 | 第46页 |
| ·抗体的纯化 | 第46-47页 |
| 4. 讨论 | 第47-48页 |
| 第四章 家蚕sHsp19.9 基因的缺失表达和Western blot 鉴定 | 第48-57页 |
| 1. 材料与试剂 | 第48-49页 |
| ·材料 | 第48页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第48页 |
| ·自配试剂 | 第48-49页 |
| 2. 方法 | 第49-52页 |
| ·缺失突变体的克隆 | 第49-51页 |
| ·质粒提取 | 第49页 |
| ·PCR 扩增 | 第49-50页 |
| ·PCR 产物与pET-28a 载体的双酶切 | 第50页 |
| ·连接反应 | 第50页 |
| ·连接产物的转化 | 第50-51页 |
| ·重组克隆的筛选与鉴定 | 第51页 |
| ·融合蛋白的表达和纯化 | 第51页 |
| ·还原与非还原SDS-PAGE 电泳 | 第51页 |
| ·Western blot 鉴定 | 第51-52页 |
| 3. 实验结果 | 第52-55页 |
| ·PCR 扩增目的片段 | 第52页 |
| ·融合蛋白的表达、纯化 | 第52-53页 |
| ·链间二硫键形成的鉴定 | 第53-55页 |
| 4. 讨论 | 第55-57页 |
| 第五章 小热激蛋白sHsp19.9 的复性和体外分子伴侣活性比较 | 第57-65页 |
| 1. 材料与试剂 | 第57页 |
| ·材料 | 第57页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第57页 |
| 2. 方法 | 第57-59页 |
| ·凝胶过滤复性 | 第57-58页 |
| ·填料重生 | 第57页 |
| ·装柱 | 第57-58页 |
| ·装样和洗脱 | 第58页 |
| ·胰蛋白酶（trypsin）敏感性实验 | 第58页 |
| ·分子伴侣活性的检测 | 第58-59页 |
| ·柠檬酸合酶（CS）的热聚集实验 | 第58-59页 |
| ·溶菌酶（lysozyme）DTT 诱导的聚集实验 | 第59页 |
| 3. 实验结果 | 第59-62页 |
| ·体外融合蛋白对胰蛋白酶（trypsin）敏感 | 第59-60页 |
| ·sHsp19.9-FL 能抑制柠檬酸合酶的热聚集 | 第60-61页 |
| ·sHsp19.9-FL 能抑制DTT 诱导的溶菌酶聚集 | 第61-62页 |
| 4. 讨论 | 第62-65页 |
| 第六章 家蚕sHsp19.9 基因应激表达和组织表达差异检测 | 第65-77页 |
| 1. 材料与试剂 | 第65-66页 |
| ·材料 | 第65页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第65页 |
| ·自配试剂 | 第65-66页 |
| 2. 方法 | 第66-70页 |
| ·家蚕的热激处理 | 第66页 |
| ·家蚕总蛋白的提取 | 第66页 |
| ·Western blot 检测热激处理后家蚕sHsp19.9 蛋白表达 | 第66页 |
| ·半定量ELISA 法测定热激处理后家蚕sHsp19.9 蛋白表达 | 第66页 |
| ·家蚕五龄幼虫各组织cDNA 的制备 | 第66-68页 |
| ·总RNA 的提取 | 第66-67页 |
| ·总RNA 的浓度的测量 | 第67页 |
| ·总RNA 中的DNA 消化 | 第67页 |
| ·RNA 反转录成cDNA | 第67-68页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第68-69页 |
| ·PCR 引物的设计 | 第68-69页 |
| ·实时荧光定量PCR 反应 | 第69页 |
| ·实时荧光定量PCR 数据分析 | 第69页 |
| ·家蚕五龄幼虫各组织总蛋白的提取 | 第69页 |
| ·Western blot 检测sHsp19.9 蛋白表达 | 第69-70页 |
| 3. 实验结果 | 第70-75页 |
| ·Western blot 检测热激处理后家蚕sHsp19.9 蛋白表达 | 第70页 |
| ·半定量ELISA 法检测热激处理后家蚕sHsp19.9 蛋白表达 | 第70-72页 |
| ·制作ELISA 标准曲线 | 第70-71页 |
| ·ELISA 法测定sHsp19.9 的蛋白表达量 | 第71-72页 |
| ·家蚕五龄幼虫主要组织sHsp19.9 基因转录水平 | 第72-75页 |
| ·实时荧光定量PCR 扩增曲线与融解曲线 | 第72-74页 |
| ·家蚕组织sHsp19.9 基因转录水平 | 第74-75页 |
| ·Western blot 检测组织中sHsp19.9 蛋白表达水平 | 第75页 |
| 4. 讨论 | 第75-77页 |
| 结论与创新点 | 第77-79页 |
| 参考文献 | 第79-83页 |
| 致谢 | 第83页 |
