| 中文摘要 | 第2-3页 |
| Abstract | 第3页 |
| 第1章 文献综述 | 第7-18页 |
| 1.1 喜树及喜树碱研究概况 | 第7-12页 |
| 1.1.1 喜树概况 | 第7页 |
| 1.1.2 喜树碱研究概况 | 第7-8页 |
| 1.1.3 喜树碱的抗癌机理 | 第8页 |
| 1.1.4 喜树碱的合成途径 | 第8-11页 |
| 1.1.5 喜树碱合成过程中关键的限速酶 | 第11-12页 |
| 1.2 大肠杆菌表达体系的研究 | 第12-14页 |
| 1.2.1 表达体系的选择 | 第12页 |
| 1.2.2 原核表达载体的选择 | 第12-14页 |
| 1.2.3 目的基因的选择 | 第14页 |
| 1.2.4 原核表达宿主细胞的选择 | 第14页 |
| 1.3 蛋白质表达分析技术的研究 | 第14-17页 |
| 1.3.1 蛋白质的样品的制备 | 第14-15页 |
| 1.3.2 蛋白质的分离 | 第15页 |
| 1.3.3 蛋白质的分析与鉴定 | 第15-16页 |
| 1.3.4 生物信息学技术 | 第16-17页 |
| 1.4 本实验的研究目的与意义 | 第17-18页 |
| 第2章 材料与方法 | 第18-39页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-19页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第18页 |
| 2.1.2 试剂及试剂盒 | 第18页 |
| 2.1.3 质粒与菌株 | 第18-19页 |
| 2.1.4 引物的设计及合成 | 第19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-39页 |
| 2.2.1 目的基因的制备 | 第19-23页 |
| 2.2.2 表达载体的构建 | 第23-29页 |
| 2.2.3 阳性克隆子筛选及验证 | 第29-30页 |
| 2.2.4 重组质粒的转化 | 第30页 |
| 2.2.5 目的蛋白的表达及提取 | 第30-31页 |
| 2.2.6 蛋白质浓度的测定 | 第31-32页 |
| 2.2.7 SDS-PAGE凝胶检测目的蛋白可溶性 | 第32-34页 |
| 2.2.8 目的蛋白表达条件的优化 | 第34-35页 |
| 2.2.9 目的蛋白的纯化 | 第35-37页 |
| 2.2.10 质谱鉴定纯化蛋白 | 第37-39页 |
| 第3章 结果与分析 | 第39-53页 |
| 3.1 SLS-like基因的制备 | 第39-41页 |
| 3.1.1 植物表达载体菌液验证 | 第39页 |
| 3.1.2 目的基因引入酶切位点后的PCR验证 | 第39-40页 |
| 3.1.3 喜树SLS候选基因的cDNA全长的扩增 | 第40-41页 |
| 3.2 表达载体的构建 | 第41-45页 |
| 3.2.1 酶切反应结果 | 第41-43页 |
| 3.2.2 基因sls-like阳性克隆子的筛选与鉴定 | 第43-45页 |
| 3.3 SLS-like蛋白的诱导表达 | 第45-49页 |
| 3.3.1 BSA蛋白标准曲线的建立 | 第45页 |
| 3.3.2 诱导表达的sls-like蛋白电泳图片 | 第45-46页 |
| 3.3.3 SLS-like蛋白表达的可溶性结果分析 | 第46-47页 |
| 3.3.4 SLS-like蛋白表达的优化 | 第47-49页 |
| 3.4 目的蛋白的纯化 | 第49-51页 |
| 3.5 液质联用鉴定纯化蛋白 | 第51-53页 |
| 第4章 讨论 | 第53-55页 |
| 4.1 疏水蛋白的形成 | 第53页 |
| 4.2 喜树sls-like基因的原核表达 | 第53页 |
| 4.3 液质联用 | 第53-54页 |
| 4.4 染色方法的选择 | 第54-55页 |
| 第5章 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-64页 |
| 附录1 | 第64-68页 |
| 附录2 | 第68-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
