摘要 | 第7-9页 |
ABSTRACT | 第9-10页 |
缩略词表(ABBREVIATIONS) | 第11-12页 |
1 前言 | 第12-21页 |
1.1 研究问题的由来 | 第12-13页 |
1.2 Micro RNA在免疫系统中的作用 | 第13-16页 |
1.2.1 Micro RNA概述 | 第13-14页 |
1.2.2 Micro RNA在免疫细胞发育过程中的作用 | 第14-15页 |
1.2.3 Micro RNA对免疫系统信号通路的调控作用 | 第15页 |
1.2.4 猪抗病相关的Micro RNA研究进展 | 第15-16页 |
1.3 miR-155 对免疫系统功能的调节 | 第16-18页 |
1.3.1 miR-155 影响免疫反应 | 第16-17页 |
1.3.2 Poly I:C刺激对miR-155 表达水平的影响 | 第17页 |
1.3.3 miR-155 靶基因的研究现状 | 第17-18页 |
1.4 调节性T细胞的研究进展 | 第18-20页 |
1.4.1 调节性T细胞的特性 | 第18-19页 |
1.4.2 在调节性T细胞内转录因子Foxp3发挥的作用 | 第19页 |
1.4.3 Foxp3-miR155-Treg信号通路 | 第19-20页 |
1.5 研究的目的与意义 | 第20-21页 |
2 技术路线、材料与方法 | 第21-38页 |
2.1 技术路线 | 第21页 |
2.2 材料 | 第21-24页 |
2.2.1 猪组织样品 | 第21-22页 |
2.2.2 细胞系、载体、菌株 | 第22页 |
2.2.3 主要试验试剂 | 第22-23页 |
2.2.4 主要生化试剂的配置 | 第23-24页 |
2.2.5 主要数据库和生物学软件 | 第24页 |
2.3 方法 | 第24-38页 |
2.3.1 SNP关联分析 | 第24-26页 |
2.3.2 流式细胞仪分选猪Treg | 第26页 |
2.3.3 细胞培养 | 第26-27页 |
2.3.4 载体的构建及相关试验方法 | 第27-30页 |
2.3.5 细胞转染试验 | 第30页 |
2.3.6 Poly I:C刺激试验 | 第30-31页 |
2.3.7 基因表达量分析 | 第31-33页 |
2.3.8 蛋白表达量分析 | 第33-35页 |
2.3.9 凝胶电泳迁移实验 | 第35-37页 |
2.3.10 数据统计分析 | 第37-38页 |
3 结果 | 第38-53页 |
3.1 两种单倍型个体的研究 | 第38-42页 |
3.1.1 A/C两种单倍型个体鉴定 | 第38-39页 |
3.1.2 流式细胞仪分选湖北白猪两种单倍型的调节性T细胞 | 第39-40页 |
3.1.3 湖北白猪两种单倍型的调节性T细胞RNA-Seq数据分析 | 第40-42页 |
3.2 杜二F2群体两种单倍型个体表达谱芯片分析 | 第42-48页 |
3.2.1 两种单倍型差异表达基因筛选 | 第42-45页 |
3.2.2 两种单倍型差异表达基因功能聚类 | 第45-48页 |
3.3 转录因子Foxp3的结合能力检测 | 第48-50页 |
3.3.1 Foxp3载体构建和超表达检测 | 第48-49页 |
3.3.2 EMSA实验检测Foxp3与A/C的结合能力差异 | 第49-50页 |
3.4 Poly I:C刺激对miR-155 表达的影响 | 第50-53页 |
3.4.1 Poly I:C刺激 3D4/21 不同时间点miR-155 的表达水平 | 第50-51页 |
3.4.2 Poly I:C刺激之后转录因子Foxp3对miR-155 表达水平的调控 | 第51-53页 |
4 讨论 | 第53-58页 |
4.1 关于转录组测序及表达谱芯片数据讨论 | 第53-55页 |
4.1.1 Treg细胞分选结果分析 | 第53页 |
4.1.2 Treg细胞测序研究分析 | 第53-54页 |
4.1.3 杜二F2群体表达谱芯片讨论分析 | 第54-55页 |
4.2 关于Foxp3蛋白在猪Bic基因上结合位点研究的讨论 | 第55-57页 |
4.2.1 猪Bic基因突变对Foxp3结合差异的影响 | 第55页 |
4.2.2 miR-155 基因表达水平分析 | 第55-56页 |
4.2.3 Poly I:C刺激之后Foxp3调控的信号通路 | 第56-57页 |
4.3 关于下一步工作的计划 | 第57-58页 |
5 小结 | 第58-60页 |
5.1 本研究的主要结果 | 第58页 |
5.2 本研究的创新点与特色 | 第58-59页 |
5.3 本研究的不足之处以及有待解决的问题 | 第59-60页 |
参考文献 | 第60-68页 |
致谢 | 第68页 |