| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第1章 绪论 | 第8-16页 |
| 1.1 课题来源 | 第8-10页 |
| 1.1.1 TET蛋白的介绍 | 第8页 |
| 1.1.2 TET蛋白功能的研究进展 | 第8-10页 |
| 1.2 蛋白质分离纯化的研究现状 | 第10-11页 |
| 1.3 可溶性蛋白获取的途径研究现状 | 第11-14页 |
| 1.3.1 体内获得可溶性外源蛋白研究现状 | 第11-12页 |
| 1.3.2 蛋白体外复性研究现状 | 第12-14页 |
| 1.4 本文主要研究内容及意义 | 第14-15页 |
| 1.5 本文技术路线 | 第15-16页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第16-24页 |
| 2.1 实验材料 | 第16-18页 |
| 2.1.1 菌株及载体 | 第16页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第16-17页 |
| 2.1.3 主要实验仪器 | 第17-18页 |
| 2.2 实验方法 | 第18-23页 |
| 2.2.1 TET突变体氨基酸密码子的优化方法 | 第18页 |
| 2.2.2 TET重叠截短体的构建 | 第18-19页 |
| 2.2.3 TET突变体蛋白可溶性验证 | 第19-20页 |
| 2.2.4 TET突变体蛋白菌体扩大培养 | 第20-21页 |
| 2.2.5 镍螯合柱亲和层析法纯化TET突变体蛋白 | 第21-22页 |
| 2.2.6 变性TET突变体蛋白体外复性 | 第22页 |
| 2.2.7 TET突变体蛋白浓度测定 | 第22页 |
| 2.2.8 TET突变体蛋白结构性质检测 | 第22-23页 |
| 2.3 本章小结 | 第23-24页 |
| 第3章 TET突变体蛋白的表达及可溶性研究 | 第24-39页 |
| 3.1 TET突变体的制备 | 第24-30页 |
| 3.1.1 改造pET28b(+)载体上的酶切位点 | 第24-25页 |
| 3.1.2 TET 目的基因与 pET28b 的重组体的构建 | 第25-27页 |
| 3.1.3 TET 核苷酸序列优化设计及优化 | 第27-28页 |
| 3.1.4 TET 截短体的制备 | 第28-30页 |
| 3.2 培养条件对TET突变体表达及可溶性影响 | 第30-34页 |
| 3.2.1 表达条件的优化 | 第30-32页 |
| 3.2.2 化学试剂对TET突变体表达及可溶性影响 | 第32-34页 |
| 3.3 融合蛋白对TET突变体表达及可溶性影响 | 第34-36页 |
| 3.3.1 SUMO与pET28b重组体的构建 | 第34-35页 |
| 3.3.2 pET28b-SUMO-TET重组体的构建 | 第35页 |
| 3.3.3 SUMO对TET突变体蛋白表达及可溶性影响 | 第35-36页 |
| 3.4 TET突变体和trigger factor共表达的研究 | 第36-38页 |
| 3.4.1 pBAD/Mys-His-A-trigger factor表达载体的构建 | 第36-37页 |
| 3.4.2 trigger factor对TET突变体蛋白表达及可溶性影响 | 第37-38页 |
| 3.5 本章小结 | 第38-39页 |
| 第4章 TET突变体的复性及光学性质的表征 | 第39-57页 |
| 4.1 引言 | 第39-40页 |
| 4.2 hTET1 突变体蛋白的制备 | 第40-44页 |
| 4.2.1 变性hTET1 突变体蛋白的纯化及复性 | 第40-43页 |
| 4.2.2 复性hTET1 突变体蛋白结构性质的表征 | 第43-44页 |
| 4.3 hTET2 突变体蛋白的制备 | 第44-48页 |
| 4.3.1 变性hTET2 突变体蛋白的纯化及复性 | 第44-47页 |
| 4.3.2 复性hTET2 突变体蛋白结构性质的表征 | 第47-48页 |
| 4.4 hTET3 突变体蛋白的制备 | 第48-52页 |
| 4.4.1 变性hTET3 突变体蛋白的纯化及复性 | 第48-51页 |
| 4.4.2 复性hTET3 突变体蛋白结构性质的表征 | 第51-52页 |
| 4.5 zebrafish-TET2 突变体蛋白的制备 | 第52-56页 |
| 4.5.1 变性zebrafish-TET2 突变体蛋白的纯化及复性 | 第52-55页 |
| 4.5.2 复性zebrafish-TET2 突变体蛋白结构性质的表征 | 第55-56页 |
| 4.6 讨论 | 第56页 |
| 4.7 本章小结 | 第56-57页 |
| 结论 | 第57-58页 |
| 建议及展望 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-63页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文及其他结果 | 第63-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
