| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 第一章 前言 | 第8-23页 |
| 1. 研究背景 | 第8-13页 |
| 1.1 三羧酸循环的重要性 | 第8-10页 |
| 1.2 线粒体功能缺失与肿瘤生成 | 第10-12页 |
| 1.3 表观遗传的调控与肿瘤生成 | 第12-13页 |
| 2. 代谢基因突变与肿瘤发生 | 第13-17页 |
| 2.1 异柠檬酸脱氢酶IDH | 第13-15页 |
| 2.2 延胡索酸氢化酶FH | 第15页 |
| 2.3 琥珀酸脱氢酶SDH | 第15-16页 |
| 2.4 代谢产物对表观遗传调控的展望 | 第16-17页 |
| 3. TET2蛋白调控表观遗传和基因表达相关分子机制 | 第17-23页 |
| 3.1 TET家族5-甲基胞嘧啶羟化酶 | 第17-19页 |
| 3.2 WT1转录因子 | 第19-21页 |
| 3.3 TET2通过结合WT1对靶基因表达进行调控 | 第21-23页 |
| 第二章 代谢基因FH和SDH突变引起代谢失衡调控表观遗传 | 第23-73页 |
| 1. 研究背景 | 第23-24页 |
| 2. 材料试剂 | 第24-28页 |
| 2.1 细胞培养用缓冲液 | 第24-25页 |
| 2.2 细胞转染用缓冲液及试剂 | 第25页 |
| 2.3 细胞裂解用缓冲液 | 第25-26页 |
| 2.4 蛋白电泳用缓冲液 | 第26-27页 |
| 2.5 细菌培养用试剂及缓冲液 | 第27页 |
| 2.6 分子克隆用试剂 | 第27页 |
| 2.7 其他试剂 | 第27-28页 |
| 3. 仪器设备 | 第28-29页 |
| 4. 实验方法 | 第29-44页 |
| 4.1 组蛋白去甲基酶的酶活测定 | 第29-32页 |
| 4.2 GC-MS方法测定细胞内代谢物浓度 | 第32-33页 |
| 4.3 FH和SDH knock-down实验 | 第33-34页 |
| 4.4 TET催化细胞内5mC转化为5hmC检测 | 第34-35页 |
| 4.5 细胞的培养和转染 | 第35-37页 |
| 4.6 免疫组化 | 第37页 |
| 4.7 细胞可渗透性的α-KG、Succinate和Fumarate的合成 | 第37-38页 |
| 4.8 荧光定量实时PCR | 第38-39页 |
| 4.9 免疫荧光实验 | 第39-40页 |
| 4.10 免疫印迹(Western Blot) | 第40-41页 |
| 4.11 定点突变实验 | 第41-42页 |
| 4.12 SDH酶活的测定 | 第42页 |
| 4.13 FH酶活的测定 | 第42页 |
| 4.14 Dot-blot检测细胞基因组DNA中5hmC的水平 | 第42-44页 |
| 5. 实验结果 | 第44-69页 |
| 5.1 肿瘤相关IDH1/2突变引起细胞内α-KG浓度的降低,2-HG的累积 | 第44-47页 |
| 5.2 2-HG可以抑制以α-KG为底物的组蛋白去甲基化酶活性 | 第47-49页 |
| 5.3 Fumarate和Succinate可以抑制以α-KG为底物的KDM活性 | 第49-51页 |
| 5.4 Fumarate和Succinate会引起组蛋白甲基化水平的上升 | 第51-53页 |
| 5.5 Fumarate和Succinate可以抑制以细胞内α-KG为底物的双加氧酶PHDs | 第53页 |
| 5.6 Fumarate、Succinate和α-KG的竞争性关系 | 第53-55页 |
| 5.7 FH和SDH knock-down减少细胞内TET催化的5hmC水平 | 第55-58页 |
| 5.8 在小鼠肝脏中抑制FH和SDH表达影响多种α-KG为底物的双加氧酶的活性及基因表达 | 第58-63页 |
| 5.9 肿瘤中发现的FH和SDH突变对α-KG为底物的双加氧酶活性的抑制 | 第63-69页 |
| 6. 讨论 | 第69-71页 |
| 6.1 Fumarate、Succinate是α-KG的竞争性拮抗剂 | 第69-70页 |
| 6.2 Fumarate、Succinate与α-KG浓度的比例可能更为重要 | 第70-71页 |
| 6.3 Fumarate可以引起异常的琥珀酰化 | 第71页 |
| 7. 小结 | 第71-73页 |
| 第三章 WT1募集TET2到特定基因启动子区域并调控基因表达 | 第73-85页 |
| 1. AML中基因突变研究背景 | 第73-74页 |
| 2. 材料和试剂 | 第74页 |
| 3. 实验方法 | 第74-76页 |
| 3.1 免疫沉淀/免疫共沉淀 | 第74-75页 |
| 3.2 TET2和WT1 knock-down实验 | 第75-76页 |
| 4. 实验结果 | 第76-82页 |
| 4.1 WT1和TET2在AML中呈现互斥突变的现象 | 第76-77页 |
| 4.2 在293T细胞中过量表达WT1和TET2可以检测到二者相互结合 | 第77-79页 |
| 4.3 WT1和TET2在小鼠化胎干细胞和骨髓细胞中相互结合 | 第79页 |
| 4.4 WT1和TET2结合的特定区域 | 第79-81页 |
| 4.5 AML中发生的TET2突变能阻断TET2与WT1的结合 | 第81页 |
| 4.6 转录因子IDAX与WT1竞争性结合 | 第81-82页 |
| 5. 讨论 | 第82-83页 |
| 6. 小结 | 第83-85页 |
| 参考文献 | 第85-93页 |
| 博士期间发表论文 | 第93-94页 |
| 致谢 | 第94-96页 |
