缩略语表 | 第6-9页 |
中文摘要 | 第9-12页 |
英文摘要 | 第12-14页 |
前言 | 第15-16页 |
文献回顾 | 第16-32页 |
第一部分 CREB及p-CREB在前列腺癌组织及不同前列腺细胞系中的表达及可能的功能 | 第32-52页 |
1 材料 | 第32-36页 |
1.1 组织芯片 | 第32页 |
1.2 细胞系 | 第32页 |
1.3 相关试剂 | 第32-33页 |
1.4 缓冲液 | 第33-35页 |
1.5 相关仪器 | 第35-36页 |
2 方法 | 第36-39页 |
2.1 不同前列腺组织芯片免疫组化染色 | 第36页 |
2.2 人正常前列腺基质永生化细胞WPMY-1、前列腺癌细胞PC3及LNCap的培养 | 第36-37页 |
2.3 三种不同细胞系的免疫细胞化学染色 | 第37-38页 |
2.4 Western blotting检测三种不同细胞系的增殖水平(PCNA表达水平) | 第38-39页 |
2.5 统计学分析 | 第39页 |
3 结果 | 第39-50页 |
3.1 CREB在不同前列腺组织中的表达情况 | 第39-42页 |
3.2 p-CREB在不同前列腺组织中的表达情况 | 第42-48页 |
3.3 CREB在不同前列腺细胞中的表达情况 | 第48-49页 |
3.4 p-CREB在不同前列腺细胞中的表达情况 | 第49页 |
3.5 Western blotting检测CREB及p-CREB在WPMY-1、PC3及LNCap细胞中的表达 | 第49-50页 |
4 讨论 | 第50-52页 |
第二部分 CREB在前列腺癌细胞增殖与凋亡中的作用 | 第52-71页 |
1 材料 | 第52-54页 |
1.1 感受态菌株 | 第52页 |
1.2 细胞系 | 第52页 |
1.3 相关试剂 | 第52-53页 |
1.4 培养基(液)及缓冲液 | 第53页 |
1.5 相关仪器 | 第53-54页 |
2 方法 | 第54-61页 |
2.1 E.coli JM109感受态的制备 | 第54页 |
2.2 LNCap细胞的总RNA提取 | 第54页 |
2.3 反转录合成cDNA | 第54-55页 |
2.4 PCR扩增CREB基因编码区 | 第55页 |
2.5 产物琼脂糖凝胶电泳分离及胶回收 | 第55-56页 |
2.6 将DNA回收产物和pcDNA3.1 质粒连接重组 | 第56-57页 |
2.7 重组质粒pcDNA3.1-CREB的扩增和鉴定 | 第57页 |
2.8 重组质粒pcDNA3.1-CREB的转染 | 第57-58页 |
2.9 转染CREB-siRNA | 第58页 |
2.10 检测CREB转染效率 | 第58-59页 |
2.11 CCK-8 试剂盒检测细胞增殖水平 | 第59页 |
2.12 TUNEL染色检测细胞凋亡 | 第59-60页 |
2.13 统计学分析 | 第60-61页 |
3 结果 | 第61-69页 |
3.1 重组质粒pcDNA3.1-CREB的鉴定结果 | 第61-63页 |
3.2 转染重组质粒pcDNA3.1-CREB对前列腺癌细胞增殖水平的影响 | 第63-66页 |
3.3 转染CREB-siRNA对前列腺癌细胞增殖水平的影响 | 第66-67页 |
3.4 转染pcDNA3.1-CREB及CREB-siRNA对前列腺癌细胞凋亡的影响 | 第67-68页 |
3.5 转染pcDNA3.1-CREB及CREB-siRNA影响前列腺癌细胞凋亡的可能机制 | 第68-69页 |
4 讨论 | 第69-71页 |
第三部分 CREB在TAM相关的前列腺癌细胞生长中的作用 | 第71-80页 |
1 材料 | 第71-72页 |
1.1 细胞系 | 第71页 |
1.2 相关试剂 | 第71-72页 |
1.3 相关仪器 | 第72页 |
2 方法 | 第72-74页 |
2.1 血液单核细胞系THP-1 的培养及其巨噬细胞诱导 | 第72页 |
2.2 诱导巨噬细胞向M1及M2型分化 | 第72-73页 |
2.3 收集M1及M2型巨噬细胞条件性培养基 | 第73页 |
2.4 M1及M2型巨噬细胞条件性培养基刺激前列腺癌细胞 | 第73页 |
2.5 Western blotting | 第73页 |
2.6 免疫细胞化学染色 | 第73-74页 |
2.7 CCK-8 试剂盒检测细胞增殖水平 | 第74页 |
2.8 统计学分析 | 第74页 |
3 结果 | 第74-79页 |
3.1 鉴定血液单核细胞系THP-1 向巨噬细胞的诱导 | 第74-75页 |
3.2 鉴定巨噬细胞向M1及M2表型诱导 | 第75-76页 |
3.3 M2型巨噬细胞条件性培养基对前列腺癌细胞生长的影响 | 第76-77页 |
3.4 CREB在M2型巨噬细胞条件性培养基促进前列腺癌细胞生长中的作用 | 第77-79页 |
4 讨论 | 第79-80页 |
小结 | 第80-81页 |
参考文献 | 第81-93页 |
个人简历和研究成果 | 第93-94页 |
致谢 | 第94页 |