| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第11-22页 |
| 1.1 研究背景 | 第11-21页 |
| 1.1.1 产溶剂梭菌 | 第11-12页 |
| 1.1.2 产溶剂梭菌中产溶剂相关调控因子的研究进展 | 第12-17页 |
| 1.1.2.1 Spo0A | 第12-14页 |
| 1.1.2.2 CcpA | 第14-16页 |
| 1.1.2.3 Rex | 第16页 |
| 1.1.2.4 sigma因子 | 第16-17页 |
| 1.1.3 微生物中AbrB的研究进展 | 第17-20页 |
| 1.1.3.1 AbrB功能的研究进展 | 第17-18页 |
| 1.1.3.2 AbrB结构的研究进展 | 第18-20页 |
| 1.1.4 丙酮丁醇梭菌AbrB的研究进展 | 第20-21页 |
| 1.2 立题意义 | 第21页 |
| 1.3 本课题主要研究内容 | 第21-22页 |
| 第二章 丙酮丁醇梭菌AbrBs突变株表型分析 | 第22-48页 |
| 2.1 实验材料与方法 | 第22-41页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第22-26页 |
| 2.1.1.1 实验对象 | 第22-23页 |
| 2.1.1.2 实验试剂及试剂盒 | 第23页 |
| 2.1.1.3 主要器材 | 第23-24页 |
| 2.1.1.4 培养基及缓冲液 | 第24-26页 |
| 2.1.2 实验方法 | 第26-41页 |
| 2.1.2.1 质粒pIMP1-P_(abrB1)-lacZ、pIMP1-P_(abrB2)-lacZ、pIMP1-P_(abrB3)-lacZ的构建 | 第26页 |
| 2.1.2.2 质粒pWJ1-abrB1、pSJ1-abrB2和pWJ1-abrB3的构建 | 第26-27页 |
| 2.1.2.3 基因abrB1、abrB2和abrB3的敲除 | 第27页 |
| 2.1.2.4 质粒pIMP1-P_(ptb)-abrB1、pIMP1-P_(ptb)-abrB2和pIMP1-P_(ptb)-abrB3的构建 | 第27-34页 |
| 2.1.2.5 丙酮丁醇梭菌的电穿孔转化、鉴定及保菌 | 第34-35页 |
| 2.1.2.6 菌株发酵 | 第35-36页 |
| 2.1.2.7 发酵底物和代谢产物分析方法 | 第36页 |
| 2.1.2.8 丙酮丁醇梭菌 β-半乳糖苷酶酶活的测定 | 第36-37页 |
| 2.1.2.9 丙酮丁醇梭菌基因组抽提方法 | 第37-38页 |
| 2.1.2.10 Southern实验流程 | 第38-41页 |
| 2.2 实验结果 | 第41-47页 |
| 2.2.1 利用lacZ报告基因系统检测abrB同源基因启动子的活性 | 第41-42页 |
| 2.2.2 abrB基因失活与突变株的发酵表型分析 | 第42-45页 |
| 2.2.3 丙酮丁醇梭菌中过表达abrB基因与表型观察 | 第45-47页 |
| 2.3 本章小结 | 第47-48页 |
| 第三章 AbrB对丙酮丁醇梭菌产酸产溶剂相关基因转录的影响 | 第48-58页 |
| 3.1 实验材料与方法 | 第48-52页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第48页 |
| 3.1.1.1 实验试剂及试剂盒 | 第48页 |
| 3.1.1.2 主要仪器 | 第48页 |
| 3.1.2 实验方法 | 第48-52页 |
| 3.1.2.1 丙酮丁醇梭菌培养条件 | 第48-49页 |
| 3.1.2.2 RNA制备 | 第49-50页 |
| 3.1.2.3 RNA反转录合成cDNA | 第50页 |
| 3.1.2.4 实时定量RT-PCR | 第50页 |
| 3.1.2.5 蛋白表达与纯化 | 第50-51页 |
| 3.1.2.6 凝胶阻滞实验 (Electrophoretic Mobility Shift Assays，EMSA) | 第51-52页 |
| 3.2 实验结果 | 第52-57页 |
| 3.2.1 824AbrB1突变株产酸产溶剂途径相关基因的转录分析 | 第52-54页 |
| 3.2.2 824AbrB2突变株产酸产溶剂途径相关基因的转录分析 | 第54-55页 |
| 3.2.3 824AbrB3突变株产酸产溶剂途径相关基因的转录分析 | 第55-57页 |
| 3.3 本章小结 | 第57-58页 |
| 第四章 AbrB3蛋白功能的分子调节 | 第58-66页 |
| 4.1 实验材料与方法 | 第58-61页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第58-59页 |
| 4.1.1.1 引物及菌株培养条件 | 第58-59页 |
| 4.1.1.2 主要器材 | 第59页 |
| 4.1.1.3 实验试剂及试剂盒 | 第59页 |
| 4.1.2 实验方法 | 第59-61页 |
| 4.1.2.1 丙酮丁醇梭菌AbrBs蛋白序列比对分析 | 第59页 |
| 4.1.2.2 AbrB3蛋白定点突变和饱和突变相关质粒的构建 | 第59页 |
| 4.1.2.3 丙酮丁醇梭菌的电穿孔转化、鉴定及保菌 | 第59-60页 |
| 4.1.2.4 菌株发酵 | 第60页 |
| 4.1.2.5 发酵底物和代谢产物分析方法 | 第60-61页 |
| 4.2 实验结果与讨论 | 第61-65页 |
| 4.2.1 丙酮丁醇梭菌AbrB3蛋白序列比对分析 | 第61-62页 |
| 4.2.2 AbrB3关键氨基酸残基的定点突变及表型分析 | 第62-63页 |
| 4.2.3 AbrB3~(R23)的饱和突变及表型分析 | 第63-65页 |
| 4.3 本章小结 | 第65-66页 |
| 第五章 全文总结 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-75页 |
| 附录A 常规实验方法 | 第75-78页 |
| 附录B 主要术语与缩写 | 第78-79页 |
| 附录C AbrB3蛋白突变引物 | 第79-83页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
