中文摘要 | 第4-6页 |
Abstract | 第6-7页 |
第1章 绪论 | 第11-18页 |
1.1 微孢子虫的生物学特征 | 第11-12页 |
1.1.1 微孢子虫形态与结构 | 第11页 |
1.1.2 蝗虫微孢子虫的形态特征 | 第11-12页 |
1.2 微孢子虫侵染机制 | 第12-13页 |
1.2.1 微孢子发芽侵染 | 第12页 |
1.2.2 微孢子虫自发侵染 | 第12-13页 |
1.2.3 细胞吞噬侵染 | 第13页 |
1.3 蝗虫微孢子虫研究动态 | 第13页 |
1.4 微孢子虫胞壁蛋白进展情况 | 第13-14页 |
1.5 RNAi干扰 | 第14-15页 |
1.6 研究意义 | 第15页 |
1.7 主要研究内容 | 第15-16页 |
1.8 实验技术路线 | 第16-18页 |
第2章 AlocSWP2基因获取及其生物信息学分析 | 第18-29页 |
2.1 实验材料、试剂及仪器设备 | 第18-19页 |
2.1.1 实验材料 | 第18页 |
2.1.2 实验试剂 | 第18页 |
2.1.3 仪器设备 | 第18-19页 |
2.2 蝗虫微孢子虫目的基因AlocSWP2获取 | 第19-21页 |
2.2.1 提取蝗虫微孢子虫总RNA | 第19页 |
2.2.2 合成cDNA第一条链 | 第19-20页 |
2.2.3 设计合成引物 | 第20页 |
2.2.4 扩增目的片段AlocSWP2 | 第20-21页 |
2.3 AlocSWP2生物信息学分析 | 第21页 |
2.4 实验结果 | 第21-27页 |
2.4.1 目的基因获取 | 第21-23页 |
2.4.2 生物信息学分析 | 第23-25页 |
2.4.3 AlocSWP2蛋白与其他种属亲缘关系 | 第25-27页 |
2.5 AlocSWP2基本生物学特性总结 | 第27-28页 |
2.6 小结 | 第28-29页 |
第3章 AlocSWP2融合蛋白原核表达及纯化 | 第29-42页 |
3.1 实验材料、仪器设备及试剂 | 第29-30页 |
3.1.1 实验材料 | 第29页 |
3.1.2 仪器设备 | 第29页 |
3.1.3 试剂配方 | 第29-30页 |
3.2 Aloc SWP2原核表达载体构建 | 第30-34页 |
3.3 GST-AlocSWP2融合蛋白原核表达 | 第34-35页 |
3.4 GST-AlocSWP2蛋白纯化 | 第35页 |
3.4.1.细胞抽提物制备 | 第35页 |
3.4.2 纯化AlocSWP2蛋白 | 第35页 |
3.5 多克隆抗体的制备 | 第35页 |
3.6 重组蛋白GST-ALocSWP2免疫印迹(western blotting) | 第35-36页 |
3.7 实验结果 | 第36-40页 |
3.7.1 构建原核表达菌株 | 第36-37页 |
3.7.2 GST-AlocSWP2融合蛋白的表达及检测 | 第37-38页 |
3.7.3 蛋白纯化 | 第38-39页 |
3.7.4 AlocSWP2蛋白的western blotting检测 | 第39-40页 |
3.8 小结 | 第40-42页 |
第4章 AlocSWP2蛋白定位探究 | 第42-45页 |
4.1 实验材料及试剂 | 第42页 |
4.1.1 实验材料 | 第42页 |
4.1.2 实验试剂 | 第42页 |
4.2 实验方法 | 第42-43页 |
4.2.1 样本的处理 | 第42页 |
4.2.2 样品的固定及包埋 | 第42-43页 |
4.2.3 免疫标记 | 第43页 |
4.3 实验结果 | 第43-44页 |
4.4 小结 | 第44-45页 |
第5章 AlocSWP2功能初探 | 第45-57页 |
5.1 实验材料、仪器设备及试剂 | 第45页 |
5.1.1 实验材料 | 第45页 |
5.1.2 仪器设备 | 第45页 |
5.1.3 试剂配方 | 第45页 |
5.2 实验方法 | 第45-47页 |
5.2.1 RNAi干扰及侵染实验 | 第45-46页 |
5.2.2 侵染实验和RNAi干扰后real-time PCR(RT-PCR)检测 | 第46-47页 |
5.3 GST-pull down/His-pull down实验 | 第47-49页 |
5.3.1 制备蝗虫中肠、脂肪体组织总蛋白 | 第47-48页 |
5.3.2 制备大量GST -AlocSWP2融合蛋白 | 第48页 |
5.3.3 GST融合蛋白的纯化 | 第48页 |
5.3.4 GST/His-pull down实验 | 第48-49页 |
5.4 实验结果 | 第49-55页 |
5.4.1 侵染实验 | 第49-51页 |
5.4.2 RNAi干扰 | 第51-52页 |
5.4.3 RT-PCR检测 | 第52-53页 |
5.4.4 GST/His-pull down结果 | 第53-55页 |
5.5 小结 | 第55-57页 |
第6章 结论与讨论 | 第57-59页 |
参考文献 | 第59-65页 |
附录 | 第65-66页 |
致谢 | 第66-67页 |
攻读硕士学位期间发表文章 | 第67页 |