| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 缩略词及符号说明 | 第11-13页 |
| 第1章 基因序列指导的天然产物发现 | 第13-25页 |
| 1.1 前言 | 第13-14页 |
| 1.2 基因组层面的天然产物发掘 | 第14-18页 |
| 1.2.1 预测产物理化性质指导的基因组挖掘 | 第15-16页 |
| 1.2.2 质谱分析指导的基因组挖掘 | 第16-17页 |
| 1.2.3 培养基添加剂 | 第17-18页 |
| 1.2.4 核糖体工程 | 第18页 |
| 1.3 途径特异性天然产物发掘 | 第18-23页 |
| 1.3.1 基因敲除/代谢谱比较 | 第19-20页 |
| 1.3.2 调控基因操作 | 第20页 |
| 1.3.3 强启动子插入 | 第20-21页 |
| 1.3.4 异源表达 | 第21-23页 |
| 1.4 本论文的立题意义及研究的主要内容 | 第23-25页 |
| 第2章 链霉菌LC6中隐性五酮安莎类基因簇的激活及其产物的生物合成 | 第25-63页 |
| 2.1 引言 | 第25-28页 |
| 2.1.1 安莎霉素的生物合成 | 第25-26页 |
| 2.1.2 五酮安莎霉素 | 第26-28页 |
| 2.1.3 链霉菌LC6 | 第28页 |
| 2.2 实验材料 | 第28-34页 |
| 2.2.1 培养基 | 第28-29页 |
| 2.2.2 试剂配制 | 第29-30页 |
| 2.2.3 常用仪器设备 | 第30-31页 |
| 2.2.4 菌株与质粒 | 第31-32页 |
| 2.2.5 引物信息 | 第32-34页 |
| 2.3 技术方法 | 第34-41页 |
| 2.3.1 大肠杆菌的培养及保藏 | 第34页 |
| 2.3.2 链霉菌的培养及保藏 | 第34页 |
| 2.3.3 PCR扩增DNA片段 | 第34-35页 |
| 2.3.4 大肠杆菌化学感受态细胞制备 | 第35-36页 |
| 2.3.5 大肠杆菌电转化感受态细胞制备 | 第36页 |
| 2.3.6 大肠杆菌热激法转化DNA | 第36页 |
| 2.3.7 大肠杆菌电击法转化DNA | 第36-37页 |
| 2.3.8 大肠杆菌质粒快速提取检测 | 第37页 |
| 2.3.9 链霉菌、大肠杆菌快速菌体PCR检测 | 第37页 |
| 2.3.10 链霉菌总DNA少量快速提取 | 第37-38页 |
| 2.3.11 大肠杆菌-链霉菌属间接合转移 | 第38页 |
| 2.3.12 链霉菌中基因敲除 | 第38-39页 |
| 2.3.13 敲除突变菌株验证 | 第39-40页 |
| 2.3.14 其它常规分子克隆操作 | 第40页 |
| 2.3.15 链霉菌发酵及提取 | 第40页 |
| 2.3.16 发酵产物的检测 | 第40-41页 |
| 2.3.17 生物信息学分析 | 第41页 |
| 2.4 实验方法 | 第41-45页 |
| 2.4.1 LC6野生型中相关基因的敲除 | 第41-42页 |
| 2.4.2 调控基因的组成型表达 | 第42页 |
| 2.4.3 LC6SARP中相关基因的敲除 | 第42-43页 |
| 2.4.4 核心基因在LZ35中的异源表达 | 第43页 |
| 2.4.5 LC6SARPΔAS-IFD突变株的构建 | 第43-44页 |
| 2.4.6 pSBT12载体的构建 | 第44-45页 |
| 2.5 结果与分析 | 第45-61页 |
| 2.5.1 五酮安莎基因簇(jlm)的生物信息学分析 | 第45-51页 |
| 3.2.4 五酮安莎生物合成的预测 | 第51页 |
| 2.5.3 LC6野生型敲除 | 第51-54页 |
| 2.5.4 组成型表达调控基因 | 第54-56页 |
| 2.5.5 安莎基因簇功能的确证 | 第56-58页 |
| 2.5.6 Juanlimycins生物合成的预测 | 第58-59页 |
| 2.5.7 jlm关键基因的异源表达 | 第59-61页 |
| 2.6 小结与讨论 | 第61-63页 |
| 第3章 链霉菌LZ35中NRPS-FAS杂合基因簇的激活及异源表达 | 第63-81页 |
| 3.1 引言 | 第63-65页 |
| 3.1.1 NRPS的生物合成 | 第64页 |
| 3.1.2 链霉菌LZ35 | 第64-65页 |
| 3.2 材料与方法 | 第65-69页 |
| 3.2.1 菌株与质粒 | 第65-66页 |
| 3.2.2 引物信息 | 第66-67页 |
| 3.2.3 has基因簇中调控基因的组成型表达 | 第67-68页 |
| 3.2.4 has基因簇的异源表达 | 第68-69页 |
| 3.3 结果与分析 | 第69-78页 |
| 3.3.1 has基因簇生物信息学分析 | 第69-74页 |
| 3.3.2 调控基因的组成型表达 | 第74-76页 |
| 3.3.3 has基因簇的异源表达 | 第76-78页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第78-81页 |
| 第4章 全文总结与展望 | 第81-83页 |
| 参考文献 | 第83-89页 |
| 致谢 | 第89-91页 |
| 附件 | 第91页 |
