| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 1 引言 | 第12-19页 |
| 1.1 氮对植物生长发育的影响 | 第12页 |
| 1.2 氨基酸对烟叶品质的影响 | 第12-13页 |
| 1.3 国内外研究现状 | 第13-17页 |
| 1.3.1 植物氨基酸转运蛋白的分类 | 第13-15页 |
| 1.3.2 植物氨基酸转运蛋白的功能 | 第15-16页 |
| 1.3.3 植物氨基酸转运蛋白的表达调控 | 第16-17页 |
| 1.4 反向遗传学研究基因功能 | 第17页 |
| 1.5 植物中游离氨基酸含量的测定 | 第17-18页 |
| 1.6 研究目的及意义 | 第18页 |
| 1.7 技术路线 | 第18-19页 |
| 2 烟草AAP基因家族分析 | 第19-30页 |
| 2.1 实验方法 | 第19-20页 |
| 2.1.1 烟草AAP基因查找与鉴定 | 第19页 |
| 2.1.2 染色体定位及基因结构分析 | 第19页 |
| 2.1.3 烟草AAP蛋白特征分析 | 第19页 |
| 2.1.4 多序列比对及系统进化树的构建 | 第19-20页 |
| 2.2 结果与分析 | 第20-26页 |
| 2.2.1 烟草AAP家族成员鉴定 | 第20-21页 |
| 2.2.2 普通烟草AAPs基因的结构分析 | 第21-22页 |
| 2.2.3 烟草AAPs基因染色体定位 | 第22-23页 |
| 2.2.4 烟草AAPs蛋白结构及其保守结构域的分析 | 第23-25页 |
| 2.2.5 烟草AAP基因家族的进化分析 | 第25-26页 |
| 2.3 讨论 | 第26-28页 |
| 2.4 小结 | 第28-30页 |
| 3 烟草NtAAP2基因的克隆 | 第30-42页 |
| 3.1 实验材料 | 第30-32页 |
| 3.1.1 烟草植物材料 | 第30页 |
| 3.1.2 质粒及菌种 | 第30页 |
| 3.1.3 试剂及仪器 | 第30-31页 |
| 3.1.4 培养基及抗生素溶液的配制 | 第31-32页 |
| 3.2 实验方法 | 第32-37页 |
| 3.2.1 烟草组织RNA的提取及检测 | 第32页 |
| 3.2.2 单链cDNA的合成 | 第32-33页 |
| 3.2.3 烟草组织DNA的提取 | 第33-34页 |
| 3.2.4 PCR反应 | 第34页 |
| 3.2.5 PCR产物的回收 | 第34-35页 |
| 3.2.6 连接T载体及转化大肠杆菌 | 第35-36页 |
| 3.2.7 鉴定阳性克隆并测序 | 第36页 |
| 3.2.8 烟草NtAAP2基因的表达模式分析 | 第36-37页 |
| 3.3 结果与分析 | 第37-40页 |
| 3.3.1 烟草组织RNA的提取及检测 | 第37页 |
| 3.3.2 NtAAP2基因的克隆 | 第37-38页 |
| 3.3.3 NtAAP2蛋白结构及保守域分析 | 第38-39页 |
| 3.3.4 NtAAP2基因结构分析 | 第39-40页 |
| 3.3.5 普通烟草NtAAP2基因表达模式分析 | 第40页 |
| 3.4 讨论 | 第40-41页 |
| 3.5 小结 | 第41-42页 |
| 4 烟草NtAAP2基因植物表达载体的构建及烟草遗传转化 | 第42-66页 |
| 4.1 材料与仪器 | 第42-44页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第42页 |
| 4.1.2 菌株和质粒 | 第42页 |
| 4.1.3 仪器设备 | 第42-43页 |
| 4.1.4 主要试剂的配置 | 第43-44页 |
| 4.2 试验方法 | 第44-52页 |
| 4.2.1 AAP2-RNAi载体的构建 | 第44-47页 |
| 4.2.2 NtAAP2过量表达载体的构建 | 第47-49页 |
| 4.2.3 烟草转基因 | 第49-50页 |
| 4.2.4 阳性转基因植株的鉴定 | 第50页 |
| 4.2.5 阳性转基因植株NtAAP2表达量分析 | 第50页 |
| 4.2.6 利用氨基酸分析烟叶氨基酸含量 | 第50-52页 |
| 4.3 结果与分析 | 第52-62页 |
| 4.3.1 NtAAP2-1/NtAAP22RNAi载体的构建 | 第52-54页 |
| 4.3.2 NtAAP2-1/NtAAP22OE载体的构建 | 第54页 |
| 4.3.3 转基因烟草的获得 | 第54-55页 |
| 4.3.4 转基因烟草的分子生物学鉴定 | 第55-59页 |
| 4.3.5 转基因烟草植株表型鉴定 | 第59-61页 |
| 4.3.6 转基因烟草叶片氨基酸含量测定 | 第61-62页 |
| 4.4 讨论 | 第62-65页 |
| 4.5 小结 | 第65-66页 |
| 5 结论与展望 | 第66-68页 |
| 5.1 结论 | 第66页 |
| 5.2 展望 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-73页 |
| 个人简历 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
