| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第13-24页 |
| 1.1 植物的先天免疫系统 | 第13-15页 |
| 1.1.1 病原相关分子模式触发的免疫反应（PTI） | 第14页 |
| 1.1.2 效应蛋白激发的免疫反应（ETI） | 第14-15页 |
| 1.1.3 系统获得抗病性 | 第15页 |
| 1.2 植物激素与植物的防卫反应 | 第15-17页 |
| 1.3 转录因子 | 第17-23页 |
| 1.3.1 WRKY转录因子的结构特点 | 第17-18页 |
| 1.3.2 WRKY转录因子的分类 | 第18页 |
| 1.3.3 WRKY转录因子的起源和进化 | 第18-19页 |
| 1.3.4 WRKY转录因子的结合序列 | 第19-20页 |
| 1.3.5 WRKY转录因子的生物学功能 | 第20-23页 |
| 1.3.5.1 WRKY转录因子在植物抗病防卫反应中的作用 | 第20-21页 |
| 1.3.5.2 WRKY转录因子在非生物胁迫中的应答反应 | 第21-22页 |
| 1.3.5.3 WRKY转录因子参与植物的生长发育 | 第22-23页 |
| 1.4 实验的目的和意义 | 第23-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-42页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-26页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第24页 |
| 2.1.2 菌株与载体 | 第24页 |
| 2.1.3 酶及主要生化试剂 | 第24页 |
| 2.1.4 PCR引物 | 第24-26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-42页 |
| 2.2.1 植物材料的培养和处理 | 第26-27页 |
| 2.2.2 植物总RNA的提取 | 第27-28页 |
| 2.2.2.1 利用Trizol Kit提取烟草总RNA | 第27页 |
| 2.2.2.2 CTAB法提取棉花总RNA | 第27-28页 |
| 2.2.3 cDNA第一链的合成 | 第28页 |
| 2.2.4 cDNA的末端加尾 | 第28-29页 |
| 2.2.5 植物基因组DNA的提取 | 第29-30页 |
| 2.2.5.1 CTAB法提取棉花基因组DNA | 第29页 |
| 2.2.5.2 小量法提取烟草基因组DNA | 第29-30页 |
| 2.2.6 cDNA全长序列旳获得 | 第30-33页 |
| 2.2.6.1 中间片段的获得 | 第30页 |
| 2.2.6.2 5′RACE获得 5′端序列 | 第30-31页 |
| 2.2.6.3 3′RACE获得 3′端序列 | 第31-32页 |
| 2.2.6.4 cDNA全长序列的获得 | 第32-33页 |
| 2.2.7 全长基因组序列的获得 | 第33页 |
| 2.2.8 PCR扩增目的片段的回收 | 第33-34页 |
| 2.2.9 目的片段与载体的连接 | 第34页 |
| 2.2.10 大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第34-35页 |
| 2.2.10.1 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第34页 |
| 2.2.10.2 大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第34-35页 |
| 2.2.11 大肠杆菌质粒DNA的提取及酶切鉴定 | 第35-36页 |
| 2.2.11.1 大肠杆菌质粒DNA的提取 | 第35页 |
| 2.2.11.2 质粒的酶切鉴定 | 第35-36页 |
| 2.2.12 基因的亚细胞定位 | 第36-37页 |
| 2.2.12.1 目的基因融合GFP表达载体的构建 | 第36页 |
| 2.2.12.2 农杆菌感受态细胞的制备 | 第36-37页 |
| 2.2.12.3 农杆菌感受态细胞的转化 | 第37页 |
| 2.2.12.4 农杆菌介导的瞬时侵染 | 第37页 |
| 2.2.13 实时荧光定量PCR | 第37-38页 |
| 2.2.13.1 实时荧光定量PCR反应体系及程序 | 第37-38页 |
| 2.2.13.2 数据处理 | 第38页 |
| 2.2.14 稳定表达烟草转基因植株的获得 | 第38-39页 |
| 2.2.14.1 植物表达载体的构建及转化 | 第38页 |
| 2.2.14.2 农杆菌介导的叶盘法转化烟草 | 第38-39页 |
| 2.2.14.3 再生幼苗的转基因鉴定 | 第39页 |
| 2.2.15 烟草种子的消毒处理 | 第39-40页 |
| 2.2.16 转基因烟草的抗病性分析 | 第40页 |
| 2.2.16.1 病原菌培养基的配制 | 第40页 |
| 2.2.16.2 病原菌的培养 | 第40页 |
| 2.2.16.3 病原菌的接种 | 第40页 |
| 2.2.16.4 转基因植株抗病性数据统计 | 第40页 |
| 2.2.17 组织化学染色分析 | 第40-41页 |
| 2.2.17.13, 3'-二氨基联苯胺（3, 3'-diaminobenzidine, DAB）染色 | 第40-41页 |
| 2.2.17.2 台盼蓝染色 | 第41页 |
| 2.2.18 网络信息资源 | 第41页 |
| 2.2.19 生物学软件 | 第41-42页 |
| 3 结果与分析 | 第42-62页 |
| 3.1 棉花GhWRKY23基因的分离 | 第42-43页 |
| 3.1.1 GhWRKY23中间片段的分离 | 第42页 |
| 3.1.2 GhWRKY235'片段的分离 | 第42页 |
| 3.1.3 GhWRKY233'片段的分离 | 第42-43页 |
| 3.1.4 GhWRKY23全长cDNA的获得 | 第43页 |
| 3.1.5 GhWRKY23 DNA序列的获得 | 第43页 |
| 3.2 GhWRKY23的序列分析 | 第43-47页 |
| 3.2.1 GhWRKY23的全长序列分析 | 第43-45页 |
| 3.2.2 GhWRKY23编码的蛋白质序列分析 | 第45-47页 |
| 3.3 棉花GhWRKY23的亚细胞定位分析 | 第47-49页 |
| 3.4 GhWRKY23的表达特性分析 | 第49-51页 |
| 3.4.1 非生物胁迫与生物胁迫下GhWRKY23转录水平的变化 | 第49-50页 |
| 3.4.2 外源信号分子作用下GhWRKY23转录水平的变化 | 第50-51页 |
| 3.5 GhWRKY23超表达烟草植株的获得和鉴定 | 第51-53页 |
| 3.5.1 GhWRKY23超表达烟草植株的获得 | 第51-52页 |
| 3.5.2 GhWRKY23超表达烟草植株的鉴定 | 第52-53页 |
| 3.6 GhWRKY23超表达烟草植株的功能分析 | 第53-62页 |
| 3.6.1 GhWRKY23超表达植株种子萌发期对信号分子的响应 | 第53-55页 |
| 3.6.2 GhWRKY23超表达植株成苗期对病原菌的敏感性 | 第55-57页 |
| 3.6.2.1 对细菌的抗性分析 | 第55页 |
| 3.6.2.2 对真菌的抗性分析 | 第55-56页 |
| 3.6.2.3 病原菌侵染叶片后的染色观察 | 第56-57页 |
| 3.6.2.4 病原菌侵染后叶片MDA含量的变化 | 第57页 |
| 3.6.3 氧化胁迫的耐受实验 | 第57-58页 |
| 3.6.4 病程相关信号分子通路中相关基因的表达特性分析 | 第58-59页 |
| 3.6.5 活性氧产生及清除相关基因的表达特性分析 | 第59-62页 |
| 4 讨论 | 第62-66页 |
| 5 结论 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第76页 |
