| 符号说明 | 第4-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第13-21页 |
| 1.1 弓形虫及弓形虫病概述 | 第13页 |
| 1.2 弓形虫生物学特性 | 第13-15页 |
| 1.2.1 弓形虫生活史 | 第13页 |
| 1.2.2 弓形虫的基因分型 | 第13-14页 |
| 1.2.3 致病机制 | 第14页 |
| 1.2.4 流行病学 | 第14-15页 |
| 1.2.5 免疫应答 | 第15页 |
| 1.3 弓形虫致密颗粒蛋白的研究 | 第15-16页 |
| 1.4 CRISPR/Cas系统 | 第16-18页 |
| 1.4.1 CRISPR/Cas研究历史 | 第16-17页 |
| 1.4.2 CRISPR/Cas系统的结构 | 第17-18页 |
| 1.5 CRISPR/Cas9 | 第18页 |
| 1.6 弓形虫疫苗的研究进展 | 第18-19页 |
| 1.7 本研究的目的意义 | 第19-21页 |
| 2 材料和方法 | 第21-41页 |
| 2.1 弓形虫、细胞及实验动物 | 第21页 |
| 2.2 主要试剂 | 第21-22页 |
| 2.3 质粒和受体菌 | 第22页 |
| 2.4 主要仪器及设备 | 第22页 |
| 2.5 主要试剂配制 | 第22页 |
| 2.6 GRA17和GRA23基因疫苗研究 | 第22-37页 |
| 2.6.1 弓形虫样品处理 | 第22-23页 |
| 2.6.2 RT-PCR扩增GRA17与GRA23基因 | 第23-27页 |
| 2.6.3 真核表达载体pVAX-GRA17、pVAX-GRA23的构建 | 第27-29页 |
| 2.6.4 重组质粒的体外表达鉴定 | 第29-30页 |
| 2.6.5 质粒的大量提取及纯化 | 第30-37页 |
| 2.7 GRA17基因缺失株弱毒苗的研究 | 第37-41页 |
| 2.7.1 基因敲除质粒的构建 | 第37页 |
| 2.7.2 DHFR抗性标记的扩增 | 第37-38页 |
| 2.7.3 GRA17基因缺失株的构建 | 第38-39页 |
| 2.7.4 阳性单克隆的筛选 | 第39-40页 |
| 2.7.5 小鼠免疫及分组 | 第40页 |
| 2.7.6 血清样品采集 | 第40页 |
| 2.7.7 Ig G抗体及IgG1、IgG2a抗体亚类的检测 | 第40页 |
| 2.7.8 免疫小鼠脾淋巴细胞悬液的制备 | 第40页 |
| 2.7.9 细胞因子水平检测 | 第40页 |
| 2.7.10 攻虫实验 | 第40-41页 |
| 3 结果 | 第41-51页 |
| 3.1 弓形虫GRA17和GRA23基因疫苗研究结果 | 第41-47页 |
| 3.1.1 弓形虫GRA17和GRA23基因片段的RT-PCR扩增 | 第41页 |
| 3.1.2 核酸疫苗重组质粒pVAX-GRA17和pVAX-GRA23的酶切鉴定结果 | 第41-42页 |
| 3.1.3 重组质粒的体外表达鉴定结果 | 第42-43页 |
| 3.1.4 小鼠血清中Ig G抗体及IgG1、IgG2a抗体亚类检测结果 | 第43-44页 |
| 3.1.5 细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-10 和IL-12p70的检测 | 第44-45页 |
| 3.1.6 免疫鼠脾淋巴细胞增殖实验 | 第45页 |
| 3.1.7 流式细胞仪分析CD3+CD4+CD8?和CD3+CD8+CD4?细胞 | 第45-46页 |
| 3.1.8 核酸疫苗的免疫保护效果评价 | 第46-47页 |
| 3.2 弓形虫RHΔGRA17虫株弱毒苗研究结果 | 第47-51页 |
| 3.2.1 RHΔGRA17虫株的构建与鉴定结果 | 第47页 |
| 3.2.2 小鼠血清中Ig G抗体及IgG1、IgG2a抗体亚类检测结果 | 第47-48页 |
| 3.2.3 细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-10 和IL-12p70检测结果 | 第48-49页 |
| 3.2.4 弓形虫RH、PYS及TgC7株急性感染试验结果 | 第49页 |
| 3.2.5 弓形虫PRU株慢性感染试验结果 | 第49-51页 |
| 4 讨论 | 第51-56页 |
| 4.1 GRA17和GRA23核酸疫苗的免疫保护性研究 | 第51-54页 |
| 4.2 RHΔGRA17弱毒苗的免疫保护性研究 | 第54-56页 |
| 5 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-66页 |
| 附录 试剂配置 | 第66-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 硕士在读期间发表的论文 | 第69页 |
