| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-25页 |
| 1.1 葡萄白粉病研究进展 | 第15-17页 |
| 1.2 泛素/26S蛋白酶体系统 | 第17-20页 |
| 1.2.1 HECT类型的E3 | 第17-18页 |
| 1.2.2 RING类型的E3 | 第18页 |
| 1.2.3 U-box类型的E3 | 第18页 |
| 1.2.4 CRLs类型的E3 | 第18-19页 |
| 1.2.5 其他类型的E3s | 第19页 |
| 1.2.6 E4酶 | 第19-20页 |
| 1.3 泛素连接酶与生物胁迫反应 | 第20-22页 |
| 1.3.1 泛素连接酶与PTI反应 | 第20-21页 |
| 1.3.2 泛素连接酶与ETI反应 | 第21-22页 |
| 1.4 泛素连接酶与非生物胁迫反应 | 第22-23页 |
| 1.5 泛素连接酶与植物生长发育 | 第23-24页 |
| 1.6 本研究的目的与意义 | 第24-25页 |
| 第二章 中国野生华东葡萄泛素连接酶VpPUB24基因克隆及序列分析 | 第25-40页 |
| 2.1 材料 | 第25页 |
| 2.1.1 葡萄材料 | 第25页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第25页 |
| 2.2 方法 | 第25-30页 |
| 2.2.1 葡萄U-box类型泛素连接酶聚类分析 | 第25页 |
| 2.2.2 材料处理 | 第25-26页 |
| 2.2.3 葡萄叶片RNA提取及反转录 | 第26页 |
| 2.2.4 引物 | 第26-29页 |
| 2.2.5 实时荧光定量PCR及PCR反应 | 第29-30页 |
| 2.2.6 常用培养基配制 | 第30页 |
| 2.3 结果与分析 | 第30-38页 |
| 2.3.1 中国野生华东葡萄白河351 U-box类型E3基因响应白粉菌分析 | 第30-33页 |
| 2.3.2 中国野生华东葡萄白河351 泛素连接酶VpPUB24基因克隆 | 第33页 |
| 2.3.3 中国野生华东葡萄白河351 泛素连接酶基因VpPUB24序列分析 | 第33-36页 |
| 2.3.4 不同葡萄中PUB24基因克隆与序列比对分析 | 第36-38页 |
| 2.4 讨论 | 第38-40页 |
| 第三章 中国野生华东葡萄泛素连接酶基因VpPUB24启动子克隆及功能分析 | 第40-48页 |
| 3.1 试验材料 | 第40页 |
| 3.1.1 葡萄材料 | 第40页 |
| 3.1.2 质粒载体与菌株 | 第40页 |
| 3.1.3 主要试剂与试剂盒 | 第40页 |
| 3.2 方法 | 第40-41页 |
| 3.2.1 启动子序列分析 | 第40页 |
| 3.2.3 启动子克隆 | 第40-41页 |
| 3.2.4 引物 | 第41页 |
| 3.2.5 启动子GUS融合表达载体构建 | 第41页 |
| 3.2.6 启动子GUS活性定量分析 | 第41页 |
| 3.3 结果与分析 | 第41-46页 |
| 3.3.1 中国野生华东葡萄泛素连接酶基因VpPUB24启动子的克隆 | 第41-42页 |
| 3.3.2 中国野生华东葡萄泛素连接酶基因VpPUB24启动子瞬时表达载体构建 | 第42-43页 |
| 3.3.3 VpPUB24基因启动子受不同生物胁迫和非生物胁迫诱导表达 | 第43-44页 |
| 3.3.4 不同葡萄PUB24基因启动子序列克隆 | 第44页 |
| 3.3.5 不同葡萄PUB24启动子序列分析 | 第44-45页 |
| 3.3.6 不同葡萄PUB24启动子受白粉菌和SA诱导表达分析 | 第45-46页 |
| 3.4 讨论 | 第46-48页 |
| 第四章 酵母双杂交筛选VpPUB24互作蛋白 | 第48-59页 |
| 4.1 材料 | 第48页 |
| 4.1.1 质粒载体 | 第48页 |
| 4.1.2 菌株 | 第48页 |
| 4.1.3 试剂 | 第48页 |
| 4.1.4 培养基及缓冲液配制 | 第48页 |
| 4.2 方法 | 第48-51页 |
| 4.2.1 中国野生华东葡萄白河351 白粉菌诱导的cDNA文库构建 | 第48-49页 |
| 4.2.2 诱饵质粒载体的构建 | 第49页 |
| 4.2.3 重组诱饵质粒转化酵母菌 | 第49页 |
| 4.2.4 酵母诱饵载体自激活验证 | 第49页 |
| 4.2.5 酵母双杂交筛选互作蛋白 | 第49页 |
| 4.2.6 酵母质粒提取 | 第49页 |
| 4.2.7 酵母插入片段的鉴定 | 第49-50页 |
| 4.2.8 酵母双杂交互作蛋白回复验证 | 第50页 |
| 4.2.9 引物 | 第50-51页 |
| 4.3 结果 | 第51-56页 |
| 4.3.1 中国野生华东葡萄泛素连接酶基因VpPUB24诱饵载体构建与转化 | 第51-52页 |
| 4.3.2 中国野生华东葡萄白河351 白粉菌诱导的cDNA文库构建 | 第52-53页 |
| 4.3.3 酵母双杂交筛选VpPUB24的互作蛋白 | 第53-56页 |
| 4.4 讨论 | 第56-59页 |
| 第五章 泛素连接酶VpPUB24与VpEXO70B1蛋白互作功能研究 | 第59-92页 |
| 5.1 材料 | 第59-60页 |
| 5.1.1 植物材料 | 第59页 |
| 5.1.2 质粒载体 | 第59页 |
| 5.1.3 菌株 | 第59页 |
| 5.1.4 试剂 | 第59-60页 |
| 5.1.5 常用溶液配制 | 第60页 |
| 5.2 方法 | 第60-64页 |
| 5.2.1 基因克隆 | 第60页 |
| 5.2.2 基因序列分析 | 第60页 |
| 5.2.3 载体构建 | 第60-61页 |
| 5.2.4 引物 | 第61-62页 |
| 5.2.5 双分子荧光互补试验 | 第62-63页 |
| 5.2.6 免疫共沉淀试验 | 第63页 |
| 5.2.7 Western blot分析 | 第63-64页 |
| 5.2.8 病原菌接种 | 第64页 |
| 5.2.9 实时荧光定量分析 | 第64页 |
| 5.2.10 蛋白降解试验 | 第64页 |
| 5.3 结果 | 第64-86页 |
| 5.3.1 VpEXO70B1基因克隆及序列分析 | 第64-68页 |
| 5.3.2 酵母双杂交验证VpPUB24与VpEXO70B1蛋白互作 | 第68-72页 |
| 5.3.3 BiFC和Co-IP试验验证VpPUB24与VpEXO70B1蛋白互作 | 第72-73页 |
| 5.3.4 泛素连接酶VpPUB24促进VpEXO70B1蛋白降解 | 第73-74页 |
| 5.3.5 VpPUB24与VpEXO70B1的亚细胞定位分析 | 第74-75页 |
| 5.3.6 中国野生华东葡萄泛素连接酶基因VpPUB24在拟南芥过量表达 | 第75-86页 |
| 5.4 讨论 | 第86-92页 |
| 第六章 泛素连接酶VpPUB24与VpICE1蛋白互作功能研究 | 第92-124页 |
| 6.1 材料 | 第92页 |
| 6.1.1 植物材料 | 第92页 |
| 6.1.2 质粒载体和菌株 | 第92页 |
| 6.1.3 试剂 | 第92页 |
| 6.2 方法 | 第92-96页 |
| 6.2.1 基因克隆 | 第92页 |
| 6.2.2 基因序列分析 | 第92-93页 |
| 6.2.3 载体构建 | 第93页 |
| 6.2.4 蛋白降解试验 | 第93页 |
| 6.2.5 拟南芥低温处理试验 | 第93-94页 |
| 6.2.6 引物 | 第94-96页 |
| 6.3 结果 | 第96-120页 |
| 6.3.1 中国野生华东葡萄白河351 VpICE1基因克隆与序列分析 | 第96-98页 |
| 6.3.2 泛素连接酶VpPUB24与Vp ICE1蛋白互作 | 第98-105页 |
| 6.3.3 泛素连接酶VpPUB24受低温诱导表达 | 第105-108页 |
| 6.3.4 葡萄ICE1基因受低温诱导表达 | 第108-109页 |
| 6.3.5 中国野生华东葡萄白河351 中ICE家族基因亚细胞定位分析 | 第109-110页 |
| 6.3.6 泛素连接酶VpPUB24促进VpICE1蛋白的积累 | 第110-112页 |
| 6.3.7 泛素连接酶VpHOS1与VpICE1蛋白互作 | 第112-113页 |
| 6.3.8 泛素连接酶VpHOS1促进VpICE1蛋白的降解 | 第113-116页 |
| 6.3.9 泛素连接酶VpHOS1基因受低温诱导表达 | 第116-117页 |
| 6.3.10 拟南芥中过表达VpPUB24提高植株抗寒性 | 第117-119页 |
| 6.3.11 中国野生华东葡萄转录因子VpICE1与VpJAZ1蛋白互作 | 第119-120页 |
| 6.4 讨论 | 第120-124页 |
| 第七章 结论和创新点 | 第124-125页 |
| 7.1 结论 | 第124页 |
| 7.2 创新点 | 第124-125页 |
| 参考文献 | 第125-135页 |
| 附录 | 第135-143页 |
| 附表 | 第143-147页 |
| 致谢 | 第147-148页 |
| 作者简介 | 第148页 |
