| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 符号说明 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-26页 |
| 1.1 小麦高分子量谷蛋白亚基基因的表达调控 | 第12-13页 |
| 1.2 禾谷类SSPs基因转录水平的表达调控 | 第13-17页 |
| 1.2.1 SSPs基因表达相关转录因子的研究进展 | 第13-16页 |
| 1.2.2 转录因子之间相互作用及可能的调控机制 | 第16-17页 |
| 1.3 DNA的甲基化及甲基化酶的研究概述 | 第17-22页 |
| 1.3.1 表观遗传与DNA的甲基化 | 第17-18页 |
| 1.3.2 DNA的甲基化方式及甲基化酶 | 第18-20页 |
| 1.3.3 DNA的甲基化对基因的表达调控 | 第20页 |
| 1.3.4 甲基化酶抑制剂及其可能的作用机制 | 第20-22页 |
| 1.4 DNA的甲基化、转录因子与基因表达之间的关系模型 | 第22-23页 |
| 1.4.1 转录因子结合到非甲基化区域从而使其免除甲基化 | 第22页 |
| 1.4.2 转录因子招募相关因子促进相关DNA甲基化 | 第22-23页 |
| 1.4.3 转录因子结合到甲基化的DNA上去除甲基化 | 第23页 |
| 1.5 SSPs表达调控的其他机制 | 第23-25页 |
| 1.6 本研究的目的、主要研究内容和意义 | 第25页 |
| 1.7 技术路线 | 第25-26页 |
| 第二章 HMW-GS启动子区域甲基化状态及相关基因表达分析 | 第26-49页 |
| 2.1 实验材料及试剂 | 第26-28页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第26页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第26-28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-34页 |
| 2.2.1 植物材料种植与处理 | 第28页 |
| 2.2.2 幼穗的采集 | 第28页 |
| 2.2.3 谷蛋白的提取 | 第28页 |
| 2.2.4 谷蛋白含量的测定 | 第28-29页 |
| 2.2.5 DNA的提取 | 第29页 |
| 2.2.6 重亚硫酸盐转化DNA | 第29-30页 |
| 2.2.7 重亚硫酸盐测序引物设计 | 第30-31页 |
| 2.2.8 重亚硫酸盐测序片段扩展及测序 | 第31-33页 |
| 2.2.9 小麦胚乳RNA的提取 | 第33页 |
| 2.2.10 RNA的反转录 | 第33页 |
| 2.2.11 实时定量PCR检测各HMW-GS及相关转录因子表达量 | 第33-34页 |
| 2.2.12 相关性分析 | 第34页 |
| 2.3 实验结果 | 第34-47页 |
| 2.3.1 50、100μM 5-azaC抑制剂处理组HMW-GS蛋白表达量分析 | 第34-36页 |
| 2.3.2 50、100μM 5-azaC处理组HMW-GS mRNA水平表达情况分析 | 第36-37页 |
| 2.3.3 对照组、50μM 5-azaC处理组核心启动子区域甲基化程度分析 | 第37-43页 |
| 2.3.4 胚乳不同发育时期甲基化程度与HMW-GS亚基表达分析 | 第43-44页 |
| 2.3.5 对照组、50μM 5-azaC处理组基因表达调控相关转录因子表达量及相关性分析 | 第44-47页 |
| 2.4 讨论 | 第47-49页 |
| 第三章 胚乳发育相关转录因子真核表达载体的构建及转化小麦 | 第49-57页 |
| 3.1 材料与试剂 | 第49-50页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第49页 |
| 3.1.2 基因序列 | 第49页 |
| 3.1.3 实验试剂 | 第49-50页 |
| 3.2 实验方法 | 第50-52页 |
| 3.2.1 TaSPA B、TaPBF D、TaGAMYB D目的片段的扩增 | 第50-51页 |
| 3.2.2 TaSPA B、TaPBF D、TaGAMYB D目标片段的回收及阳性菌落筛选 | 第51页 |
| 3.2.3 质粒的提取及真核表达载体的构建 | 第51-52页 |
| 3.2.4 农杆菌感受态的制备及转化 | 第52页 |
| 3.2.5 农杆菌介导的小麦苗端生长点转化 | 第52页 |
| 3.3 实验结果 | 第52-55页 |
| 3.3.1 TaSPA、TaPBF、TaGAMYB的扩增 | 第52-53页 |
| 3.3.2 TaSPA、TaPBF、TaGAMYB酶切及载体酶切 | 第53页 |
| 3.3.3 农杆菌阳性菌落的鉴定 | 第53-54页 |
| 3.3.4 小麦遗传转化与转基因株系鉴定 | 第54-55页 |
| 3.3.5 实时定量PCR检测外源基因表达水平 | 第55页 |
| 3.4 讨论 | 第55-57页 |
| 第四章 胚乳发育相关转录因子原核表达载体的构建及蛋白纯化 | 第57-63页 |
| 4.1 实验材料 | 第57-58页 |
| 4.1.1 基因序列 | 第57页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第57-58页 |
| 4.2 实验方法 | 第58-59页 |
| 4.2.1 原核表达载体的构建 | 第58页 |
| 4.2.2 蛋白的诱导表达 | 第58页 |
| 4.2.3 SDS-PAGE检测基因的表达量 | 第58页 |
| 4.2.4 蛋白的纯化 | 第58-59页 |
| 4.3 实验结果 | 第59-62页 |
| 4.3.1 原核表达载体的构建 | 第59-60页 |
| 4.3.2 转录因子TaSPA-B、TaPBF-D、TaGAMYB-D蛋白的诱导 | 第60-61页 |
| 4.3.3 转录因子TaSPA-B、TaPBF-D蛋白的纯化 | 第61-62页 |
| 4.4 讨论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 硕士期间发表的文章 | 第74页 |
| 硕士期间参加的会议 | 第74-75页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第75页 |
