| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一部分 研究背景 | 第12-40页 |
| 一 肿瘤转移基本研究进展 | 第12-15页 |
| （一）肿瘤转移的概念和机制简介 | 第12-14页 |
| （二）乳腺癌转移机制 | 第14-15页 |
| 二 上皮-间质转换（EMT）的概念和分类 | 第15-26页 |
| （一）上皮-间质转换（EMT）的概念 | 第15页 |
| （二）EMT的类型 | 第15-16页 |
| （三）EMT的生物标志分子 | 第16-18页 |
| （四）EMT的分子激活机制 | 第18-22页 |
| （五）TGF-β 家族简介 | 第22-24页 |
| （六）EMT与乳腺癌转移 | 第24-26页 |
| 三 长链非编码RNA研究进展 | 第26-35页 |
| （一）长链非编码RNA概述 | 第26-27页 |
| （二）长链非编码RNA的生物学功能 | 第27页 |
| （三）长链非编码RNA的主要作用机制 | 第27-31页 |
| （四）长链非编码RNA在癌症中的作用 | 第31-33页 |
| （五）TGF-β 信号通路和长链非编码RNA的crosstalk | 第33-35页 |
| 四 EZH2和癌症 | 第35-37页 |
| （一）EZH2概述 | 第35页 |
| （二）EZH2在癌症中作用 | 第35-36页 |
| （三）EZH2翻译后修饰 | 第36-37页 |
| 五 LONG NONCODING RNA ANCR简介 | 第37页 |
| 六 本论文研究内容及意义 | 第37-40页 |
| （一） 立题依据 | 第37-38页 |
| （二）研究内容及意义 | 第38-40页 |
| 第二部分 实验材料与方法 | 第40-63页 |
| 一、实验材料 | 第40-45页 |
| （一） 实验仪器 | 第40-41页 |
| （二） 试剂 | 第41-42页 |
| （三） 抗体 | 第42页 |
| （四） 质粒 | 第42-45页 |
| （五） 细胞系 | 第45页 |
| 二、实验方法 | 第45-63页 |
| Ⅰ、分子生物学实验方法 | 第45-56页 |
| （一） 表达质粒构建 | 第45页 |
| （二） 干涉（Knockdown）质粒构建 | 第45-46页 |
| （三） 质粒提取方法 | 第46页 |
| （四） RNA提取、逆转录和实时定量Real-time PCR | 第46-49页 |
| （五） 免疫印迹（Western Bloting） | 第49-50页 |
| （六） 免疫共沉淀实验（CoIP） | 第50-51页 |
| （七）染色质免疫共沉淀实验（ChIP） | 第51-53页 |
| （八） 免疫荧光实验(IF) | 第53-54页 |
| （九）RNA免疫共沉淀（RIP） | 第54-55页 |
| （十）RNA pulldown实验 | 第55-56页 |
| Ⅱ、细胞生物学实验方法 | 第56-60页 |
| （一） 细胞培养 | 第56-57页 |
| （三） 慢病毒包装和侵染 | 第57-58页 |
| （四）报告基因检测 | 第58页 |
| （五）Transwell细胞侵袭和迁移实验 | 第58页 |
| （六）细胞划痕实验 | 第58-59页 |
| （七）明胶酶谱实验 | 第59-60页 |
| （八） MTT细胞增殖检测 | 第60页 |
| Ⅲ、临床病理及活体实验 | 第60-62页 |
| （一）免疫组化实验（IHC） | 第60-61页 |
| （二） 苏木精-伊红染色（HE，hematoxylin-eosin staining） | 第61页 |
| （三）裸鼠成瘤实验 | 第61页 |
| （四）裸鼠转移实验 | 第61-62页 |
| Ⅳ、统计分析 | 第62-63页 |
| 第三部分 实验结果与分析 | 第63-86页 |
| 一、LNCRNA ANCR和EZH2结合并且能够促进EZH2泛素化降解 | 第63-68页 |
| （一）lncRNA ANCR和EZH2能够在乳腺癌细胞中结合 | 第63页 |
| （二）ANCR和EZH2结合能够影响EZH2蛋白表达量但是不影响mRNA表达 | 第63-64页 |
| （三）ANCR结合EZH2促进EZH2泛素化降解 | 第64-66页 |
| （四）ANCR通过促进CDK1对EZH2苏氨酸345和 487 位磷酸化增加EZH2泛素化途径降解 | 第66-68页 |
| 二、LNCRNA ANCR在乳腺癌组织中和乳腺癌细胞系中呈低表达 | 第68-69页 |
| 三、敲低ANCR诱发乳腺上皮细胞和乳腺癌细胞发生EMT | 第69-71页 |
| （一）ANCR沉默诱发乳腺上皮细胞MCF10A发生EMT | 第69-71页 |
| （二） ANCR在乳腺癌中也能够影响EMT | 第71页 |
| 四、ANCR抑制乳腺癌细胞迁移和侵袭 | 第71-76页 |
| （一）沉默ANCR促进乳腺癌细胞侵袭和迁移 | 第71-74页 |
| （二）过表达ANCR抑制乳腺癌细胞侵袭和迁移 | 第74-76页 |
| 五、过表达EZH2部分逆转ANCR对乳腺上皮细胞和乳腺癌细胞EMT和转移的抑制 | 第76-79页 |
| （一）过表达EZH2部分逆转ANCR对乳腺上皮细胞和乳腺癌细胞EMT的抑制 | 第76-77页 |
| （二）过表达EZH2部分回复ANCR对乳腺上皮细胞侵袭和转移能力的抑制 | 第77-78页 |
| （三）过表达EZH2部分回复ANCR对乳腺癌细胞侵袭和转移能力的抑制 | 第78-79页 |
| 六、ANCR抑制乳腺上皮细胞和乳腺癌细胞的增殖 | 第79-81页 |
| （一）沉默ANCR促进乳腺上皮细胞的增殖 | 第79-80页 |
| （二）过表达ANCR抑制乳腺上皮细胞和乳腺癌细胞的增殖 | 第80-81页 |
| 七、ANCR过表达抑制乳腺癌肿瘤的形成和远端转移 | 第81-83页 |
| （一）ANCR过表达抑制乳腺癌原位瘤生长 | 第81-82页 |
| （二）ANCR过表达抑制乳腺癌远端的转移 | 第82-83页 |
| 八、TGFΒ 能够抑制ANCR在乳腺癌细胞中的表达 | 第83-86页 |
| （一）TGFβ 抑制ANCR的表达 | 第84页 |
| （二） TGFβ 抑制ANCR promoter区域的H3和H4组蛋白乙酰化 | 第84-85页 |
| （三）TGFβ 促进HDAC3的表达并使增加其结合到ANCR启动子上 | 第85-86页 |
| 第四部分 讨论 | 第86-91页 |
| 一、ANCR在乳腺癌不同亚型中的表达情况 | 第86-87页 |
| 二、ANCR调控EZH2稳定性 | 第87-89页 |
| （一）ANCR和CDK1不能直接的结合 | 第87-89页 |
| （二）ANCR对EZH2稳定性的调控，主要通过影响CDK1对EZH2磷酸化修饰来实现 | 第89页 |
| 三、ANCR抑制乳腺癌侵袭和转移的作用模式 | 第89-91页 |
| 主要结论和创新点 | 第91-92页 |
| 一、主要结论 | 第91页 |
| 二、创新点 | 第91-92页 |
| 参考文献 | 第92-105页 |
| 附录一 | 第105-107页 |
| 致谢 | 第107-108页 |
| 在学期间公开发表论文及著作情况 | 第108页 |
