| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 引言 | 第11-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-27页 |
| 1.1 自身免疫性疾病及Th17细胞 | 第12-13页 |
| 1.1.1 自身免疫性疾病 | 第12页 |
| 1.1.2 Th17细胞的发现 | 第12-13页 |
| 1.2 Th17细胞相关因子 | 第13-18页 |
| 1.2.1 促炎细胞因子 | 第13页 |
| 1.2.2 肿瘤坏死因子(TNF-α) | 第13-15页 |
| 1.2.3 白介素6(IL-6) | 第15-17页 |
| 1.2.4 白介素17A和17F(IL-17A和17F) | 第17-18页 |
| 1.3 大肠杆菌表达系统 | 第18-21页 |
| 1.3.1 大肠杆菌表达系统及特点 | 第18-20页 |
| 1.3.2 pET表达系统简介 | 第20-21页 |
| 1.4 毕赤酵母表达体系 | 第21-25页 |
| 1.4.1 毕赤酵母表达菌株 | 第22-24页 |
| 1.4.2 毕赤酵母表达载体 | 第24-25页 |
| 1.4.3 外源蛋白的表达条件 | 第25页 |
| 1.5 本论文的研究内容及意义 | 第25-27页 |
| 2 人肿瘤坏死因子的表达与纯化 | 第27-47页 |
| 2.1 绪论 | 第27页 |
| 2.2 实验材料 | 第27-29页 |
| 2.2.1 材料和试剂 | 第27-29页 |
| 2.2.2 主要仪器 | 第29页 |
| 2.3 实验方法 | 第29-34页 |
| 2.3.1 目的基因的合成 | 第29-30页 |
| 2.3.2 感受态细胞E.coli BL21(DE3)的制备及pET23a-TNF-α的转化 | 第30页 |
| 2.3.3 BCA法检测总蛋白含量 | 第30-31页 |
| 2.3.4 重组蛋白的诱导表达及表达条件优化 | 第31-32页 |
| 2.3.5 重组蛋白表达的可溶性检测 | 第32页 |
| 2.3.6 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第32页 |
| 2.3.7 琼脂糖凝胶电泳 | 第32-33页 |
| 2.3.8 聚乙烯亚胺沉淀法 | 第33页 |
| 2.3.9 硫酸铵沉淀法 | 第33页 |
| 2.3.10 目的蛋白的静态吸附 | 第33-34页 |
| 2.3.11 目的蛋白的Ni-NTA亲和树脂层析 | 第34页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第34-46页 |
| 2.4.1 重组质粒的提取验证及蛋白表达验证 | 第34-36页 |
| 2.4.2 重组蛋白的表达条件优化 | 第36-40页 |
| 2.4.3 重组蛋白的可溶性检测 | 第40-41页 |
| 2.4.4 聚乙烯亚胺的沉淀条件优化 | 第41-42页 |
| 2.4.5 硫酸铵沉淀条件优化 | 第42-43页 |
| 2.4.6 目的蛋白的亲和树脂层析 | 第43-45页 |
| 2.4.7 目的蛋白的表达纯化工艺总结 | 第45-46页 |
| 2.5 小结 | 第46-47页 |
| 3 人白介素6、17A、17F的表达与纯化 | 第47-70页 |
| 3.1 绪论 | 第47页 |
| 3.2 实验材料 | 第47-49页 |
| 3.2.1 材料和试剂 | 第47-49页 |
| 3.2.2 主要仪器 | 第49页 |
| 3.3 实验方法 | 第49-57页 |
| 3.3.1 目的基因的合成 | 第49-51页 |
| 3.3.2 毕赤酵母表达菌种保存 | 第51页 |
| 3.3.3 重组质粒的线性化 | 第51页 |
| 3.3.4 毕赤酵母感受态细胞的制备 | 第51-52页 |
| 3.3.5 电转化法构建重组毕赤酵母 | 第52页 |
| 3.3.6 重组酵母转化子Mut~+表型筛选及PCR鉴定 | 第52-53页 |
| 3.3.7 重组酵母培养及诱导表达 | 第53-54页 |
| 3.3.8 重组酵母的诱导表达条件优化 | 第54-55页 |
| 3.3.9 发酵上清液硫酸铵沉淀 | 第55-56页 |
| 3.3.10 硫酸铵沉淀产物的脱盐预处理 | 第56页 |
| 3.3.11 目的蛋白的层析纯化 | 第56-57页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第57-68页 |
| 3.4.1 重组质粒的提取 | 第57页 |
| 3.4.2 重组质粒的线性化 | 第57-58页 |
| 3.4.3 重组毕赤酵母His~+表型的筛选 | 第58-59页 |
| 3.4.4 重组毕赤酵母转化子Mut~+表型筛选及PCR鉴定 | 第59-61页 |
| 3.4.5 重组毕赤酵母的诱导表达 | 第61-64页 |
| 3.4.6 重组毕赤酵母的诱导表达条件优化结果 | 第64-66页 |
| 3.4.7 发酵上清液的硫酸铵沉淀 | 第66-67页 |
| 3.4.8 脱盐预处理 | 第67-68页 |
| 3.4.9 目的蛋白的层析纯化 | 第68页 |
| 3.5 小结 | 第68-70页 |
| 4 聚苯乙烯型吸附剂对Th17细胞相关因子的吸附研究 | 第70-76页 |
| 4.1 绪论 | 第70页 |
| 4.2 实验材料 | 第70页 |
| 4.2.1 材料和试剂 | 第70页 |
| 4.2.2 主要仪器 | 第70页 |
| 4.3 实验方法 | 第70-73页 |
| 4.3.1 蛋白浓度的测定 | 第70-71页 |
| 4.3.2 吸附剂的预处理 | 第71-72页 |
| 4.3.3 吸附剂的吸附动力学研究 | 第72页 |
| 4.3.4 吸附剂的吸附等温线研究 | 第72-73页 |
| 4.4 实验结果与讨论 | 第73-75页 |
| 4.4.1 吸附剂的湿干重比 | 第73页 |
| 4.4.2 吸附动力学 | 第73-74页 |
| 4.4.3 吸附等温线 | 第74-75页 |
| 4.5 小结 | 第75-76页 |
| 结论 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-82页 |
| 附录A Th17细胞主要相关因子的氨基酸序列 | 第82-83页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
