| 摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4-5页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-34页 |
| 1.1 滚环复制技术 | 第10-15页 |
| 1.1.1 滚环扩增的基本原理 | 第10页 |
| 1.1.2 RCA的分类及其特性 | 第10-12页 |
| 1.1.2.1 线性RCA | 第10-11页 |
| 1.1.2.2 指数RCA | 第11-12页 |
| 1.1.2.3 多引物RCA | 第12页 |
| 1.1.3 滚环扩增技术的应用进展 | 第12-14页 |
| 1.1.3.1 在核酸测序中的应用 | 第12页 |
| 1.1.3.2 细胞原位检测分析中的应用 | 第12-13页 |
| 1.1.3.3 在DNA芯片中的应用 | 第13页 |
| 1.1.3.4 在蛋白质芯片上的应用 | 第13-14页 |
| 1.1.4 滚环扩增技术的发展前景 | 第14-15页 |
| 1.2 Click反应 | 第15-20页 |
| 1.2.1 Click反应的发展过程 | 第15页 |
| 1.2.2 Click反应的原理 | 第15-16页 |
| 1.2.3 Click反应的应用 | 第16-20页 |
| 1.2.3.1 Click反应在生物化学领域的应用 | 第16-18页 |
| 1.2.3.2 Click反应在化学传感器中的应用 | 第18-19页 |
| 1.2.3.3 Click反应在药物开发领域的应用 | 第19-20页 |
| 1.2.4 Click反应的发展展望 | 第20页 |
| 1.3 蛋白糖基化 | 第20-23页 |
| 1.3.1 蛋白质糖基化的主要类型 | 第20-21页 |
| 1.3.2 糖基化蛋白的检测方法 | 第21-22页 |
| 1.3.2.1 放射性标记法检测糖蛋白 | 第21页 |
| 1.3.2.2 分子荧光标记法检测糖蛋白 | 第21页 |
| 1.3.2.3 电泳法检测糖蛋白 | 第21-22页 |
| 1.3.2.4 凝集素标记法检测糖蛋白 | 第22页 |
| 1.3.2.5 抗体标记法检测糖蛋白 | 第22页 |
| 1.3.2.6 化学酵素法检测糖蛋白 | 第22页 |
| 1.3.3 糖基化在生命体中的作用 | 第22-23页 |
| 1.3.3.1 信号传导途径调节 | 第22-23页 |
| 1.3.3.2 参与细胞壁的合成 | 第23页 |
| 1.3.3.3 糖基化与疾病 | 第23页 |
| 1.3.3.4 降解调控蛋白质 | 第23页 |
| 1.4 细胞代谢标记 | 第23-29页 |
| 1.4.1 细胞代谢标记的发展 | 第23-24页 |
| 1.4.2 糖代谢标记的应用 | 第24-29页 |
| 1.5 激光扫描共聚焦显微镜 | 第29-33页 |
| 1.5.1 LSCM的发展 | 第29-30页 |
| 1.5.2 LSCM的原理 | 第30-31页 |
| 1.5.3 LSCM的应用 | 第31-32页 |
| 1.5.3.1 细胞内Ca2+和pH值的动态分析 | 第31页 |
| 1.5.3.2 细胞中荧光标记的分子和结构的检测 | 第31页 |
| 1.5.3.3 荧光光漂白恢复技术 | 第31-32页 |
| 1.5.3.4 长时程观察细胞 | 第32页 |
| 1.5.4 LSCM的应用技巧 | 第32页 |
| 1.5.4.1 样品制备 | 第32页 |
| 1.5.4.2 荧光探针的选择 | 第32页 |
| 1.5.5 LSCM的发展前景 | 第32-33页 |
| 1.6 本论文的立题依据和主要研究内容 | 第33-34页 |
| 第二章 酶标仪读数法检测细胞代谢标记的糖 | 第34-50页 |
| 2.1 引言 | 第34页 |
| 2.2 实验部分 | 第34-38页 |
| 2.2.1 仪器与试剂 | 第34-36页 |
| 2.2.2 溶液配制 | 第36页 |
| 2.2.3 细胞培养 | 第36页 |
| 2.2.4 实验步骤 | 第36-38页 |
| 2.2.4.1 96孔板检测实验步骤 | 第36-37页 |
| 2.2.4.2 流式细胞仪检测实验步骤 | 第37-38页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第38-49页 |
| 2.3.1 滚环复制放大技术测定细胞表面代谢标记糖的检测原理 | 第38-39页 |
| 2.3.2 MTT细胞活性检测 | 第39-40页 |
| 2.3.3 滚环复制的放大效果 | 第40-41页 |
| 2.3.4 实验条件的优化 | 第41-44页 |
| 2.3.4.1 催化剂的优化 | 第41-42页 |
| 2.3.4.2 CHCH-DNA浓度的优化 | 第42-43页 |
| 2.3.4.3 FITC-DNA浓度的优化 | 第43-44页 |
| 2.3.5 同一细胞上不同糖含量的检测 | 第44-46页 |
| 2.3.6 实验方案可行性分析 | 第46-48页 |
| 2.3.7 流式细胞仪检测 | 第48-49页 |
| 2.4 本章小结 | 第49-50页 |
| 第三章 基于DNA滚环扩增技术检测细胞表面代谢标记的糖 | 第50-60页 |
| 3.1 引言 | 第50页 |
| 3.2 实验部分 | 第50-52页 |
| 3.2.1 仪器与试剂 | 第50-51页 |
| 3.2.2 溶液配制 | 第51页 |
| 3.2.3 细胞培养 | 第51页 |
| 3.2.4 实验步骤 | 第51-52页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第52-58页 |
| 3.3.1 基于RCA技术对细胞表面代谢标记糖的成像检测原理 | 第52-53页 |
| 3.3.2 催化剂的优化实验 | 第53-54页 |
| 3.3.3 B16细胞的成像 | 第54-55页 |
| 3.3.4 4TO7细胞的成像 | 第55-56页 |
| 3.3.5 不同的糖处理同一种细胞 | 第56-58页 |
| 3.4 本章小结 | 第58-60页 |
| 第四章 基于FRET和DNA RCA技术检测细胞表面特定蛋白上特异性的糖 | 第60-68页 |
| 4.1 引言 | 第60页 |
| 4.2 实验部分 | 第60-63页 |
| 4.2.1 仪器与试剂 | 第60-61页 |
| 4.2.2 细胞培养 | 第61-62页 |
| 4.2.3 实验步骤 | 第62-63页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第63-67页 |
| 4.3.1 细胞表面特异性糖蛋白FRET成像的实验原理 | 第63页 |
| 4.3.2 FRET对的选择 | 第63-64页 |
| 4.3.3 FRET的检测 | 第64-67页 |
| 4.4 本章小结 | 第67-68页 |
| 结论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文目录 | 第76-77页 |
