中文摘要 | 第14-16页 |
ABSTRACT | 第16-17页 |
第一章 综述 | 第18-31页 |
1.1 周围神经髓鞘结构 | 第18页 |
1.2 周围神经中包裹轴突的施万细胞 | 第18-19页 |
1.3 施万细胞与晶状体纤维细胞特异表达的Periaxin蛋白 | 第19-21页 |
1.3.1 Periaxin的分布与功能 | 第19-20页 |
1.3.2 Periaxin的结构 | 第20-21页 |
1.4 EphrinB2及其受体EphB2 | 第21-23页 |
1.5 研究目的及意义 | 第23-24页 |
参考文献 | 第24-31页 |
第二章 L-Periaxin蛋白与EphrinB2蛋白的结合区域分析 | 第31-43页 |
2.1 前言 | 第31页 |
2.2 实验材料 | 第31页 |
2.2.1 质粒及细胞系 | 第31页 |
2.2.2 试剂及仪器 | 第31页 |
2.3 实验方法 | 第31-34页 |
2.3.1 重组载体构建 | 第31-32页 |
2.3.2 细胞培养 | 第32页 |
2.3.3 细胞爬片 | 第32页 |
2.3.4 细胞转染 | 第32页 |
2.3.5 免疫荧光染色实验 | 第32页 |
2.3.6 双分子荧光互补实验 | 第32-33页 |
2.3.7 海肾荧光素酶互补实验 | 第33页 |
2.3.8 免疫共沉淀实验 | 第33-34页 |
2.4 实验结果 | 第34-40页 |
2.4.1 L-periaxin与EphrinB2在RSC96细胞中存在免疫荧光共定位 | 第34-35页 |
2.4.2 L-periaxin与EphrinB2之间存在相互作用 | 第35页 |
2.4.3 L-periaxin的PDZ结构域与EphrinB2蛋白的C末端结合 | 第35-40页 |
2.5 讨论 | 第40-41页 |
参考文献 | 第41-43页 |
第三章 S-periaxin蛋白与EphrinB2蛋白相互作用分析 | 第43-50页 |
3.1 前言 | 第43页 |
3.2 实验材料 | 第43页 |
3.2.1 质粒及细胞系 | 第43页 |
3.2.2 试剂及仪器 | 第43页 |
3.3 实验方法 | 第43-45页 |
3.3.1 细胞培养 | 第43页 |
3.3.2 细胞爬片 | 第43-44页 |
3.3.3 细胞转染 | 第44页 |
3.3.4 双分子荧光互补 | 第44页 |
3.3.5 海肾荧光素酶互补实验 | 第44-45页 |
3.3.6 免疫共沉淀 | 第45页 |
3.3.7 GST Pull-down实验 | 第45页 |
3.4 实验结果 | 第45-48页 |
3.4.1 S-periaxin与EphrinB2之间存在相互作用 | 第45-47页 |
3.4.2 S-periaxin的PDZ结构域与EphrinB2的C末端结合 | 第47-48页 |
3.5 讨论 | 第48页 |
参考文献 | 第48-50页 |
第四章 对L-periaxin的分子状态影响L-periaxin在细胞中的定位 | 第50-58页 |
4.1 前言 | 第50页 |
4.2 实验材料 | 第50页 |
4.2.1 质粒及细胞系 | 第50页 |
4.2.2 试剂及仪器 | 第50页 |
4.3 实验方法 | 第50-52页 |
4.3.1 细胞培养 | 第50页 |
4.3.2 细胞爬片 | 第50-51页 |
4.3.3 细胞转染 | 第51页 |
4.3.4 NLS3多肽孵育 | 第51页 |
4.3.5 膜蛋白、核蛋白和胞质蛋白抽提 | 第51页 |
4.3.6 免疫荧光染色 | 第51页 |
4.3.7 双分子荧光互补 | 第51-52页 |
4.4 实验结果 | 第52-56页 |
4.4.1 L-periaxin的NLS结构域结合在C端的酸性结构域形成首尾相接的分子结构 | 第52-54页 |
4.4.2 DRP2结合L-periaxin的NLS区域促进L-periaxin的膜上定位 | 第54页 |
4.4.3 体外合成的NLS3多肽促进L-periaxin的细胞膜定位 | 第54-56页 |
4.5 讨论 | 第56页 |
参考文献 | 第56-58页 |
第五章 L-Periaxin的敲除对RSC96细胞增殖与周期的影响 | 第58-64页 |
5.1 前言 | 第58页 |
5.2 实验材料 | 第58页 |
5.2.1 质粒及细胞系 | 第58页 |
5.2.2 试剂及仪器 | 第58页 |
5.3 实验方法 | 第58-59页 |
5.3.1 细胞培养 | 第58-59页 |
5.3.2 细胞转染 | 第59页 |
5.3.3 Western blotting检测细胞中Periaxin蛋白表达情况 | 第59页 |
5.3.4 MTT法测细胞生长 | 第59页 |
5.3.5 流式细胞术检测细胞周期 | 第59页 |
5.4 实验结果 | 第59-61页 |
5.4.1 TALEN敲除L-periaxin基因的RSC96细胞只表达S-Periaxin蛋白 | 第59-60页 |
5.4.2 L-periaxin表达促进RSC96细胞的增殖 | 第60-61页 |
5.4.3 TALEN敲除L-periaxin基因RSC96细胞被阻止在细胞的S期 | 第61页 |
5.5 讨论 | 第61-62页 |
参考文献 | 第62-64页 |
附录 | 第64-66页 |
攻读学位期间取得的研究成果 | 第66-67页 |
致谢 | 第67-68页 |
个人简况及联系方式 | 第68-69页 |