| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 1 前言 | 第10-22页 |
| 1.1 基因组编辑技术发展历程 | 第10-12页 |
| 1.1.1 锌指蛋白核酸酶技术(ZFNs) | 第10-11页 |
| 1.1.2 转录激活因子效应物核酸酶技术(TALNs) | 第11-12页 |
| 1.2 CRISPR/Cas9系统 | 第12-19页 |
| 1.2.1 CRISPR/Cas系统发展 | 第12-14页 |
| 1.2.2 CRISPR/Cas系统的分类 | 第14-15页 |
| 1.2.3 CRISPR/Cas9系统的作用原理 | 第15-16页 |
| 1.2.4 CRISPR/Cas9靶位点设计原则 | 第16页 |
| 1.2.5 CRISPR/Cas9系统的应用 | 第16-17页 |
| 1.2.6 CRISPR/Cas9系统在植物研究中的应用 | 第17-18页 |
| 1.2.7 CRISPR/Cas9系统潜在问题 | 第18-19页 |
| 1.3 水稻品质性状简介 | 第19-20页 |
| 1.3.1 水稻糯性性状 | 第19页 |
| 1.3.2 水稻香味性状 | 第19-20页 |
| 1.4 研究目的与意义 | 第20-22页 |
| 2 研究材料与方法 | 第22-39页 |
| 2.1 研究材料 | 第22-26页 |
| 2.1.1 水稻材料 | 第22页 |
| 2.1.2 载体 | 第22页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第22页 |
| 2.1.4 主要试剂与培养基 | 第22-26页 |
| 2.2 研究方法 | 第26-39页 |
| 2.2.1 相关生物学实验方法 | 第26-29页 |
| 2.2.2 CRISPR/Cas9多靶点载体的构建 | 第29-33页 |
| 2.2.3 连接产物的转化(电击法) | 第33页 |
| 2.2.4 阳性克隆检测 | 第33-34页 |
| 2.2.5 农杆菌介导的遗传转化 | 第34-36页 |
| 2.2.6 水稻材料T_0代阳性植株检测 | 第36页 |
| 2.2.7 水稻T_0代转化植株靶位点突变检测 | 第36页 |
| 2.2.8 T-DNA-free植株检测 | 第36页 |
| 2.2.9 双波长法测定水稻转化植株中直链淀粉含量 | 第36-37页 |
| 2.2.10 氢氧化钾浸泡法鉴定水稻转化植株香味 | 第37-38页 |
| 2.2.11 转化植株主要农艺性状分析 | 第38-39页 |
| 3 研究结果 | 第39-56页 |
| 3.1 水稻材料中两个品质性状基因靶位点检测 | 第39-41页 |
| 3.2 CRISPR/Cas9多靶点载体的构建 | 第41-43页 |
| 3.2.1 水稻两个品质性状基因的靶点引物 | 第41页 |
| 3.2.2 不同载体的sgRNA表达盒构建 | 第41-42页 |
| 3.2.3 Cas9/sgRNA表达载体的构建 | 第42-43页 |
| 3.3 水稻材料遗传转化 | 第43-44页 |
| 3.4 水稻材料T0代阳性植株检测 | 第44-45页 |
| 3.5 水稻材料T0代植株突变情况分析 | 第45-49页 |
| 3.6 T-DNA-free检测 | 第49-50页 |
| 3.7 水稻材料209B的T0代及T1代突变植株直链淀粉的含量分析 | 第50-53页 |
| 3.8 水稻材料Y58S的T0代及T1代突变植株香味分析 | 第53-54页 |
| 3.9 水稻材料209B和Y58S的T0代纯合突变植株主要农艺性状考察 | 第54-55页 |
| 3.10 水稻材料209B和Y58S的T1代纯合突变植株主要农艺性状考察 | 第55-56页 |
| 4 结论与讨论 | 第56-60页 |
| 4.1 讨论 | 第56-57页 |
| 4.1.1 CRISPR/Cas9系统中脱靶效应的影响因素 | 第56页 |
| 4.1.2 CRISPR/Cas9系统中稳定性遗传特点 | 第56-57页 |
| 4.2 结论 | 第57-58页 |
| 4.3 创新点 | 第58页 |
| 4.4 问题与展望 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 附录 | 第67-68页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第68页 |
