| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 绪论 | 第8-14页 |
| 1.1 氨基甲酸乙酯概述 | 第8-9页 |
| 1.1.1 氨基甲酸乙酯的形成机制 | 第8-9页 |
| 1.1.2 氨基甲酸乙酯的控制策略 | 第9页 |
| 1.2 氨基甲酸乙酯水解酶研究进展 | 第9-10页 |
| 1.3 酶蛋白稳定性提高的改良策略 | 第10-12页 |
| 1.3.1 分子手段改造提高酶蛋白的稳定性 | 第10-11页 |
| 1.3.2 融合双亲短肽改造提高酶蛋白的稳定性 | 第11-12页 |
| 1.3.3 其他手段改造提高酶蛋白的稳定性 | 第12页 |
| 1.4 立体依据及研究内容 | 第12-14页 |
| 1.4.1 立题依据 | 第12-13页 |
| 1.4.2 研究内容 | 第13-14页 |
| 第二章 材料与方法 | 第14-21页 |
| 2.1 实验材料 | 第14-15页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第14页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第14页 |
| 2.1.3 培养基 | 第14-15页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第15页 |
| 2.2 产氨基甲酸乙酯水解酶菌株筛选及鉴定 | 第15-16页 |
| 2.2.1 产氨基甲酸乙酯水解酶的菌株筛选 | 第15-16页 |
| 2.2.2 产氨基甲酸乙酯水解酶的菌种鉴定 | 第16页 |
| 2.3 纯化方法 | 第16-17页 |
| 2.3.1 氨基甲酸乙酯水解酶的纯化 | 第16-17页 |
| 2.3.2 突变体的纯化 | 第17页 |
| 2.4 分子操作方法 | 第17-19页 |
| 2.4.1 基因N端融合双亲短肽 | 第17-18页 |
| 2.4.2 基因定点突变 | 第18页 |
| 2.4.3 重组质粒的构建 | 第18-19页 |
| 2.5 分析方法 | 第19-21页 |
| 2.5.1 氨基甲酸乙酯水解酶活性测定方法 | 第19-20页 |
| 2.5.2 蛋白质浓度测定 | 第20页 |
| 2.5.3 十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） | 第20页 |
| 2.5.4 酶学性质分析 | 第20-21页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第21-38页 |
| 3.1 产氨基甲酸乙酯水解酶菌株筛选及酶的性质比较 | 第21-24页 |
| 3.1.1 产氨基甲酸乙酯水解酶菌株筛选 | 第21-22页 |
| 3.1.2 产氨基甲酸乙酯水解酶菌株鉴定 | 第22页 |
| 3.1.3 S. saprophyticus L1氨基甲酸乙酯水解酶纯化 | 第22-23页 |
| 3.1.4 不同来源氨基甲酸乙酯水解酶性质比较 | 第23-24页 |
| 3.2 N端融合双亲短肽提高氨基甲酸乙酯水解酶稳定性 | 第24-28页 |
| 3.2.1 双亲短肽的选择 | 第24-25页 |
| 3.2.2 UH融合双亲短肽重组质粒的构建 | 第25页 |
| 3.2.3 UH重组酶的表达与纯化 | 第25-26页 |
| 3.2.4 融合蛋白SAP1-UH酶学性质分析 | 第26-27页 |
| 3.2.5 融合蛋白SAP1-UH的动力学参数测定 | 第27-28页 |
| 3.2.6 融合SAP1对UH酶学性质影响机理分析 | 第28页 |
| 3.3 定点突变提高氨基甲酸乙酯水解酶的稳定性 | 第28-38页 |
| 3.3.1 计算机辅助设计突变位点 | 第28-31页 |
| 3.3.2 UH单突变体的表达与纯化 | 第31页 |
| 3.3.3 UH单突变体酶学性质分析 | 第31-33页 |
| 3.3.4 UH双突变体的表达与纯化 | 第33-34页 |
| 3.3.5 双突变体酶学性质分析 | 第34-36页 |
| 3.3.6 双突变体的结构模拟及分析 | 第36-38页 |
| 主要结论与展望 | 第38-40页 |
| 主要结论 | 第38页 |
| 展望 | 第38-40页 |
| 致谢 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-45页 |
| 附录: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第45页 |
