| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 中英文缩略词 | 第10-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-20页 |
| 1.1 胆固醇氧化酶 | 第13-17页 |
| 1.1.1 简介 | 第13页 |
| 1.1.2 产胆固醇氧化酶的菌种来源 | 第13-14页 |
| 1.1.3 胆固醇氧化酶的催化中心和反应机理 | 第14页 |
| 1.1.4 胆固醇氧化酶的实际应用 | 第14-17页 |
| 1.2 酶的催化混乱性学说以及多功能酶 | 第17-19页 |
| 1.2.1 简介 | 第17-18页 |
| 1.2.2 催化混乱性的分类 | 第18页 |
| 1.2.3 催化混乱性的生物学意义 | 第18页 |
| 1.2.4 催化混乱性的鉴定方法 | 第18-19页 |
| 1.3 本课题的选择和研究意义 | 第19-20页 |
| 第二章 材料和仪器 | 第20-24页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-24页 |
| 2.1.1 培养基 | 第20页 |
| 2.1.2 菌株和质粒 | 第20页 |
| 2.1.3 工具酶、试剂盒和主要化学试剂 | 第20-21页 |
| 2.1.4 仪器 | 第21-22页 |
| 2.1.5 缓冲液的配置 | 第22-24页 |
| 第三章 方法 | 第24-40页 |
| 3.1 产胆固醇氧化酶的菌种筛选 | 第24-27页 |
| 3.1.1 产胆固醇氧化酶的菌种初筛和菌种保存 | 第24页 |
| 3.1.2 产胆固醇氧化酶的菌种复筛和菌种保存 | 第24-27页 |
| 3.2 胆固醇氧化酶的分离、纯化、编码基因重组、表达和再纯化 | 第27-35页 |
| 3.2.1 胆固醇氧化酶的分离纯化 | 第27-28页 |
| 3.2.2 氨基末端(N)和羧基末端(C)氨基酸序列测定和比对 | 第28页 |
| 3.2.3 胆固醇氧化酶基因的克隆和在E.coli中的表达和纯化 | 第28-35页 |
| 3.3 胆固醇氧化酶的理化性质测定 | 第35页 |
| 3.3.1 胆固醇氧化酶的最适pH测定 | 第35页 |
| 3.3.2 胆固醇氧化酶的最适温度测定 | 第35页 |
| 3.3.3 胆固醇氧化酶的有机溶剂耐受性测定 | 第35页 |
| 3.3.4 胆固醇氧化酶的底物谱测定 | 第35页 |
| 3.4 pBAD/M-ChOx质粒的饱和突变 | 第35-40页 |
| 3.4.1 基本原理 | 第35-36页 |
| 3.4.2 全质粒的PCR扩增以及饱和突变 | 第36-38页 |
| 3.4.3 饱和突变菌株的活力检测 | 第38页 |
| 3.4.4 突变菌株的胆固醇氧化酶的表达、纯化和活性测定 | 第38-40页 |
| 第四章 结果 | 第40-51页 |
| 4.1 产胆固醇氧化酶的菌株筛选 | 第40-41页 |
| 4.1.1 产胆固醇氧化酶的菌株初筛及复筛 | 第40-41页 |
| 4.1.2 菌种的保管和鉴定 | 第41页 |
| 4.2 胆固醇氧化酶的分离纯化 | 第41-44页 |
| 4.2.1 胆固醇氧化酶的分离和纯化 | 第41-42页 |
| 4.2.2 胆固醇氧化酶的蛋白质序列和基因序列的确定 | 第42页 |
| 4.2.3 胆固醇氧化酶的基因的克隆、重组及其表达产物的纯化 | 第42-44页 |
| 4.3 胆固醇氧化酶的理化性质测定 | 第44-46页 |
| 4.3.1 胆固醇氧化酶的最适pH值测定 | 第44页 |
| 4.3.2 胆固醇氧化酶的最适温度测定 | 第44-45页 |
| 4.3.3 胆固醇氧化酶的有机溶剂耐受性测定 | 第45页 |
| 4.3.4 胆固醇氧化酶的底物谱测定 | 第45-46页 |
| 4.4 pBAD/M-ChOx质粒的饱和突变 | 第46-51页 |
| 4.4.1 胆固醇氧化酶的饱和突变筛选及其表达产物的纯化 | 第46-47页 |
| 4.4.2 突变体纯酶的活力检测 | 第47-51页 |
| 第五章 讨论 | 第51-54页 |
| 第六章 结论和展望 | 第54-56页 |
| 附录A | 第56-66页 |
| 参考文献 | 第66-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 附录B | 第73页 |
