| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-24页 |
| 1.1 雄性生殖干细胞研究进展 | 第13-18页 |
| 1.1.1 雄性生殖干细胞的生物学特性与体外培养 | 第13-17页 |
| 1.1.2 雄性生殖干细胞的永生化 | 第17-18页 |
| 1.2 胰岛素样生长因子-1 研究进展 | 第18-20页 |
| 1.2.1 IGFs系统简述 | 第18-19页 |
| 1.2.2 胰岛素样生长因子-1 系统对细胞增殖与凋亡的调控 | 第19-20页 |
| 1.3 长链非编码RNA研究进展 | 第20-22页 |
| 1.3.1 长链非编码RNA定义 | 第20页 |
| 1.3.2 长链非编码RNA对雄生生殖干细胞和生精能力的研究进展 | 第20-22页 |
| 1.3.3 长链非编码RNA H19研究进展 | 第22页 |
| 1.4 小结与展望 | 第22-24页 |
| 第二章 牛雄性生殖干细胞体外分离纯化、鉴定及永生化 | 第24-41页 |
| 2.1 材料 | 第24-25页 |
| 2.1.1 主要实验动物 | 第24页 |
| 2.1.2 主要仪器和材料 | 第24-25页 |
| 2.1.3 主要实验试剂 | 第25页 |
| 2.2 方法 | 第25-28页 |
| 2.2.1 主要溶液的配制 | 第25页 |
| 2.2.2 分离、富集牛mGSCs | 第25页 |
| 2.2.3 mGSCs的磁珠分选 | 第25-26页 |
| 2.2.4 磁珠分选后细胞的培养 | 第26页 |
| 2.2.5 细胞生长曲线分析 | 第26页 |
| 2.2.6 细胞免疫荧光染色 | 第26页 |
| 2.2.7 总RNA的提取 | 第26页 |
| 2.2.8 荧光实时定量PCR | 第26-27页 |
| 2.2.9 Western bloting | 第27页 |
| 2.2.10 移植细胞到睾丸生精缺陷小鼠实验 | 第27页 |
| 2.2.11 CDy1染色 | 第27-28页 |
| 2.2.12 慢病毒的包装 | 第28页 |
| 2.2.13 统计分析 | 第28页 |
| 2.3 结果 | 第28-38页 |
| 2.3.1 牛雄性生殖干细胞体外分离纯化、鉴定 | 第28-31页 |
| 2.3.2 牛雄性生殖干细胞的永生化及生物学特性鉴定 | 第31-33页 |
| 2.3.3 牛雄性生殖干细胞体外分化鉴定 | 第33-35页 |
| 2.3.4 牛雄性生殖干细胞体外移植生精障碍小鼠的曲细精管中 | 第35-38页 |
| 2.4 讨论 | 第38-40页 |
| 2.5 小结 | 第40-41页 |
| 第三章 长链非编码RNA H19通过IGF-1 信号通路调控牛雄性生殖干细胞的增殖与凋亡 | 第41-52页 |
| 3.1 材料 | 第41-42页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第41页 |
| 3.1.2 主要仪器和材料 | 第41页 |
| 3.1.3 主要实验试剂 | 第41-42页 |
| 3.2 方法 | 第42-44页 |
| 3.2.1 CCK-8 检测细胞活力 | 第42页 |
| 3.2.2 流式细胞术检测细胞的凋亡率 | 第42页 |
| 3.2.3 EDU染色 | 第42-43页 |
| 3.2.4 细胞或睾丸组织切片染色 | 第43页 |
| 3.2.5 实时定量PCR | 第43页 |
| 3.2.6 Western blot | 第43页 |
| 3.2.7 SiRNA的转染 | 第43-44页 |
| 3.3 结果 | 第44-50页 |
| 3.3.1 IGF-1 及其受体在牛睾丸组织和永生化牛mGSCs细胞中的表达 | 第44-45页 |
| 3.3.2 IGF-1 能够促进牛mGSCs的增殖 | 第45-46页 |
| 3.3.3 IGF-1 信号通路是牛mGSCs生存所必须的 | 第46-47页 |
| 3.3.4 长链非编码RNA H19被干扰后能够抑制IGF-1 信号通路 | 第47-50页 |
| 3.4 讨论 | 第50-51页 |
| 3.5 小结 | 第51-52页 |
| 结论 | 第52页 |
| 本文研究的创新点及进一步研究的课题 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-59页 |
| 附录 | 第59-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 作者简介 | 第62页 |
