| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 缩略词表 | 第8-12页 |
| 一、课题提出与前人研究进展 | 第12-26页 |
| 1 课题提出 | 第12-13页 |
| 2 我国草莓生产上的主要病毒简介 | 第13-14页 |
| 3 草莓脱毒苗和抗病毒苗的研究现状 | 第14-16页 |
| 4 CRISPR/Cas系统的研究现状 | 第16-25页 |
| 4.1 CRISPR/Cas系统的研究历史 | 第16-17页 |
| 4.2 CRISPR/Cas系统的基本结构 | 第17-18页 |
| 4.3 CRISPR/Cas系统的分类 | 第18-20页 |
| 4.4 CRISPR/Cas系统的作用机制 | 第20-22页 |
| 4.5 CRISPR/Cas9技术在植物中的应用 | 第22-25页 |
| 5 本课题的目标与意义 | 第25-26页 |
| 二、CRISPR/Cas9载体的构建 | 第26-48页 |
| 1 材料与方法 | 第27-36页 |
| 1.1 菌株 | 第27页 |
| 1.2 质粒 | 第27-28页 |
| 1.3 试剂和试剂盒 | 第28页 |
| 1.4 实验方法 | 第28-36页 |
| 2 结果与分析 | 第36-42页 |
| 2.1 Cas9片段的扩增 | 第36-37页 |
| 2.2 sgRNA片段的扩增 | 第37页 |
| 2.3 Cas9与pCAMBIA1302重组载体的构建 | 第37-39页 |
| 2.4 sgRNA与pUC19重组载体的构建 | 第39-41页 |
| 2.5 sgRNA复合片段载体的构建 | 第41-42页 |
| 3 讨论 | 第42-48页 |
| 3.1 将CRISPR/Cas9载体拆分成pCC和pSG两个基本载体 | 第42-43页 |
| 3.2 pCC载体的构建思路 | 第43-44页 |
| 3.3 pSG载体的构建思路 | 第44-48页 |
| 三、草莓CRISPR/Cas9技术应用体系的建立 | 第48-66页 |
| 1 材料与方法 | 第48-57页 |
| 1.1 材料 | 第48页 |
| 1.2 菌株与质粒 | 第48页 |
| 1.3 试剂和试剂盒 | 第48-49页 |
| 1.4 实验方法 | 第49-57页 |
| 2 结果与分析 | 第57-62页 |
| 2.1 草莓PDS基因的CRISPR位点分析 | 第57-58页 |
| 2.2 红颜草莓PDS基因片段的克隆 | 第58页 |
| 2.3 作用于PDS基因的CRISPR/Cas9载体的构建 | 第58-59页 |
| 2.4 ‘红颜’草莓无菌苗体系的建立 | 第59-60页 |
| 2.5 农杆菌侵染红颜草莓叶盘 | 第60-61页 |
| 2.6 CRISPR/Cas9作用于PDS基因靶位点的验证 | 第61-62页 |
| 3 讨论 | 第62-66页 |
| 3.1 红颜草莓遗传转化体系的影响因素 | 第62-64页 |
| 3.2 CRISPR/Cas9对PDS基因靶位点的作用分析 | 第64-66页 |
| 四、草莓抗镶脉病毒植株体系的建立 | 第66-80页 |
| 1 材料与方法 | 第66-70页 |
| 1.1 材料、菌株、质粒、试剂和试剂盒 | 第66页 |
| 1.2 实验方法 | 第66-70页 |
| 2 结果与分析 | 第70-78页 |
| 2.1 草莓SVBV基因的CRISPR位点分析 | 第70-73页 |
| 2.2 SVBV病毒ORFⅣ和ORF Ⅵ部分片段的克隆 | 第73-74页 |
| 2.3 作用于SVBV病毒ORF Ⅵ的CRISPR/Cas9载体的构建 | 第74-75页 |
| 2.4 同时作用于SVBV病毒双位点的CRISPR/Cas9载体的构建 | 第75-76页 |
| 2.5 农杆菌侵染红颜草莓叶盘 | 第76-77页 |
| 2.6 转基因苗的验证 | 第77-78页 |
| 3 讨论 | 第78-80页 |
| 五、需要进一步研究的内容 | 第80-82页 |
| 参考文献 | 第82-90页 |
| 附录 | 第90-102页 |
| 致谢 | 第102-103页 |
| 学习期间发表论文情况 | 第103页 |
