| 中文摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 1 前言 | 第12-23页 |
| ·链格孢菌的危害 | 第12-13页 |
| ·芸薹生链格孢的危害 | 第13-14页 |
| ·真菌MAPK级联系统的研究现状 | 第14-17页 |
| ·真菌MAPK级联系统在细胞信号转导中的作用和意义 | 第14-15页 |
| ·Hog1-MAPK级联系统研究现状 | 第15-17页 |
| ·真菌MAPK信号级联系统特异性互作机制现状 | 第17-22页 |
| ·研究的目的和意义 | 第22-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-49页 |
| ·材料 | 第23-27页 |
| ·菌株及其培养 | 第23页 |
| ·质粒 | 第23页 |
| ·酶和主要试剂 | 第23页 |
| ·主要仪器和设备 | 第23-24页 |
| ·培养基及溶液配制 | 第24-26页 |
| ·本实验中所使用的引物序列 | 第26-27页 |
| ·方法 | 第27-49页 |
| ·本实验常用的分子生物学方法 | 第27-31页 |
| ·总RNA的提取（Trizor法） | 第27页 |
| ·反转录cDNA第一链的合成 | 第27-28页 |
| ·基因组DNA的提取（CTAB/NaCl法） | 第28页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第28页 |
| ·PCR产物的回收和纯化 | 第28-29页 |
| ·DNA胶回收和纯化 | 第29页 |
| ·大肠杆菌的感受态细胞制备 | 第29-30页 |
| ·大肠杆菌的感受态转化 | 第30页 |
| ·提取质粒DNA | 第30-31页 |
| ·质粒的浓缩 | 第31页 |
| ·原生质体的转化 | 第31页 |
| ·芸薹生链格孢AbPbs2基因的克隆 | 第31-33页 |
| ·芸薹生链格孢基因组数据库中AbPbs2编码序列的查找 | 第31-32页 |
| ·AbPbs2基因全长cDNA和DNA序列克隆 | 第32-33页 |
| ·AbPbs2的功能研究 | 第33-38页 |
| ·打靶载体的构建 | 第33页 |
| ·打靶载体的构建 | 第33-34页 |
| ·大肠杆菌的感受态细胞制备和转化 | 第34页 |
| ·重组质粒筛选及菌落PCR检测 | 第34-35页 |
| ·提取质粒DNA并浓缩 | 第35页 |
| ·转化打靶载体片段的克隆 | 第35-36页 |
| ·质粒DNA与片段的浓缩 | 第36页 |
| ·原生质体的转化 | 第36页 |
| ·AbPbs2基因插入突变体的筛选和验证 | 第36-38页 |
| ·AbPbs2基因插入突变体的RT-PCR验证 | 第38页 |
| ·AbPbs2基因插入突变体生物学性状分析 | 第38-39页 |
| ·AbPbs2基因插入突变体的菌落生长速度检测 | 第38-39页 |
| ·AbPbs2基因在孢子产生过程中的作用 | 第39页 |
| ·AbPbs2基因在渗透压调节的作用 | 第39页 |
| ·AbPbs2基因对杀菌剂的影响 | 第39页 |
| ·AbPbs2基因对致病性的作用 | 第39页 |
| ·△AbPbs2突变体的互补 | 第39-43页 |
| ·AbPbs2基因全长片段的克隆 | 第39-40页 |
| ·PCR产物的回收以及与载体连接 | 第40-41页 |
| ·转化大肠杆菌感受态细胞 | 第41页 |
| ·重组质粒筛选和鉴定 | 第41页 |
| ·互补载体质粒AbPbs2-pCB1532的提取与浓缩 | 第41-42页 |
| ·原生质体转化 | 第42页 |
| ·△AbPbs2突变体互补体的筛选 | 第42页 |
| ·△AbPbs2突变体互补体的验证 | 第42-43页 |
| ·D位点缺失的AbPbs2基因（AbPbs2△D）互补△AbPbs2突变体 | 第43-47页 |
| ·重叠延伸PCR扩增D位点缺失的AbPbs2基因（AbPbs2△D） | 第43页 |
| ·重叠延伸PCR扩增AbPbs2△D基因 | 第43-45页 |
| ·PCR产物的回收并与克隆载体连接 | 第45-46页 |
| ·大肠杆菌感受态的转化 | 第46页 |
| ·重组质粒筛选和验证 | 第46-47页 |
| ·重组质粒的提取和浓缩 | 第47页 |
| ·互补载体转化△AbPbs2突变体的原生质体 | 第47页 |
| ·AbPbs2△D基因互补△AbPbs2突变体的筛选和验证 | 第47页 |
| ·△AbPbs2/ AbPbs2△D的生物学性状分析 | 第47-49页 |
| ·△AbPbs2/ AbPbs2△D的菌落生长速度检测 | 第47页 |
| ·△AbPbs2/ AbPbs2△D孢子的产生 | 第47页 |
| ·△AbPbs2/ AbPbs2△D的渗透压调节 | 第47-48页 |
| ·杀菌剂对△AbPbs2/ AbPbs2△D的影响 | 第48页 |
| ·△AbPbs2/ AbPbs2△D的致病性检测 | 第48-49页 |
| 3 结果与分析 | 第49-66页 |
| ·AbPbs2基因的克隆 | 第49-51页 |
| ·AbPbs2基因扩增引物设计 | 第49页 |
| ·A.brassicicola总RNA提取 | 第49-50页 |
| ·A.brassicicola总DNA提取 | 第50页 |
| ·AbPbs2基因cDNA和DNA全长序列的扩增 | 第50-51页 |
| ·AbPbs2的功能研究 | 第51-55页 |
| ·打靶载体的构建 | 第51-52页 |
| ·菌落PCR检测重组质粒 | 第52页 |
| ·转化打靶载体片段的克隆 | 第52-53页 |
| ·基因插入突变体的筛选和验证 | 第53-54页 |
| ·AbPbs2基因插入突变体反转录PCR验证 | 第54-55页 |
| ·AbPbs2基因插入突变体生物学性状分析 | 第55-58页 |
| ·AbPbs2基因插入突变体的菌落生长速度检测 | 第55-56页 |
| ·AbPbs2基因在孢子产生过程中的作用 | 第56-57页 |
| ·AbPbs2基因对渗透压调节的作用 | 第57页 |
| ·AbPbs2基因对杀菌剂的影响 | 第57-58页 |
| ·AbPbs2基因插入突变体的致病性检测 | 第58页 |
| ·△AbPbs2突变体的互补 | 第58-61页 |
| ·AbPbs2基因的克隆 | 第58-59页 |
| ·重组质粒筛选和鉴定 | 第59页 |
| ·菌落PCR检测互补质粒 | 第59-60页 |
| ·△AbPbs2互补体的验证 | 第60-61页 |
| ·D位点缺失的AbPbs2基因（AbPbs2△D）互补△AbPbs2突变体 | 第61-66页 |
| ·重叠延伸PCR扩增AbPbs2△D | 第61页 |
| ·△AbPbs2/ AbPbs2△D突变体的验证 | 第61-62页 |
| ·△AbPbs2/ AbPbs2△D的生物学性状分析 | 第62页 |
| ·△AbPbs2/ AbPbs2△D的菌落生长速度检测 | 第62-63页 |
| ·△AbPbs2/ AbPbs2△D孢子的产生 | 第63-64页 |
| ·△AbPbs2/ AbPbs2△D的渗透压调节 | 第64页 |
| ·杀菌剂对△AbPbs2/ AbPbs2△D的影响 | 第64-65页 |
| ·△AbPbs2/ AbPbs2△D的致病性检测 | 第65-66页 |
| 4 讨论 | 第66-68页 |
| ·基因功能的克隆 | 第66页 |
| ·关于基因插入筛选标记 | 第66页 |
| ·关于△AbPbs2突变体互补的研究 | 第66页 |
| ·关于载体构建 | 第66-68页 |
| 5 结论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
