| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 中英文对照缩略语表 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-27页 |
| 1 脱落酸 | 第13-17页 |
| ·ABA的合成 | 第13-14页 |
| ·ABA在植物适应逆境胁迫中的作用 | 第14-15页 |
| ·ABA信号转导 | 第15-17页 |
| 2 WRKY转录因子 | 第17-21页 |
| ·WRKY转录因子的结构特点 | 第17-18页 |
| ·WRKY转录因子的生物学功能 | 第18-21页 |
| 3 蛋白互作的筛选与鉴定方法 | 第21-25页 |
| ·酵母双杂交 | 第21页 |
| ·双分子荧光互补技术(BiFC) | 第21-22页 |
| ·免疫共沉淀(Co-IP) | 第22-23页 |
| ·Pull down | 第23-24页 |
| ·体外免疫沉淀凝胶激酶反应 | 第24-25页 |
| 4 本研究的目的和研究内容 | 第25-27页 |
| 第二章 ZmWRKY4和ZmMPK5相互作用的鉴定 | 第27-47页 |
| 摘要 | 第27页 |
| Abstract | 第27-28页 |
| 1 材料与方法 | 第28-39页 |
| ·实验材料 | 第28-29页 |
| ·ZmWRKY4基因克隆 | 第29-32页 |
| ·载体构建 | 第32-33页 |
| ·质粒的大量提取 | 第33页 |
| ·玉米原生质体的分离及转化 | 第33-34页 |
| ·His-ZmWRKY4融合蛋白的诱导表达 | 第34-35页 |
| ·His-ZmWRKY4融合蛋白的纯化 | 第35页 |
| ·His-ZmWRKY4融合蛋白的浓缩 | 第35页 |
| ·ZmMPK5蛋白抗体的制备 | 第35页 |
| ·玉米叶片总蛋白的提取 | 第35-36页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第36页 |
| ·Western Blotting | 第36-37页 |
| ·His-Pull down | 第37-38页 |
| ·免疫共沉淀(Co-IP) | 第38页 |
| ·体外免疫沉淀 | 第38页 |
| ·凝胶激酶活性分析 | 第38-39页 |
| 2 结果与分析 | 第39-43页 |
| ·载体构建与鉴定 | 第39-40页 |
| ·融合蛋白的表达、纯化及鉴定 | 第40-42页 |
| ·His-Pull down | 第42页 |
| ·免疫共沉淀(Co-IP) | 第42-43页 |
| ·体外免疫沉淀凝胶激酶反应 | 第43页 |
| 3 讨论 | 第43-47页 |
| 第三章 ZmWRKY4对于玉米中活性氧ROS积累的影响 | 第47-65页 |
| 摘要 | 第47页 |
| Abstract | 第47-48页 |
| 1 材料与方法 | 第48-53页 |
| ·实验材料 | 第48-49页 |
| ·载体构建 | 第49-50页 |
| ·ZmWRKY4干扰引物的设计 | 第50页 |
| ·ZmWRKY4的dsRNA体外合成 | 第50-51页 |
| ·质粒的大量提取 | 第51-52页 |
| ·玉米原生质体的分离及转化 | 第52页 |
| ·玉米叶片总RNA的提取 | 第52页 |
| ·玉米原生质体总RNA的提取 | 第52页 |
| ·cDNA第一条链的合成 | 第52页 |
| ·Real-time荧光定量PCR | 第52-53页 |
| ·玉米原生质体的H_2O_2染色 | 第53页 |
| 2 结果与分析 | 第53-62页 |
| ·载体构建与鉴定 | 第53-54页 |
| ·RNA纯度检测 | 第54-55页 |
| ·外源H_2O_2处理对玉米ZmWRKY4基因表达的影响 | 第55-56页 |
| ·ABA通过内源H_2O_2调节玉米ZmWRKY4基因的表达 | 第56-57页 |
| ·ZmWRKY4基因对于RBOH基因家族的影响 | 第57-59页 |
| ·ABA诱导下ZmWRKY4基因对于原生质体中H_2O_2积累的影响 | 第59-62页 |
| 3 讨论 | 第62-65页 |
| 第四章 ABA信号通路中ZmWRKY4与ZmMPK5的关系 | 第65-77页 |
| 摘要 | 第65页 |
| Abstract | 第65-66页 |
| 1 材料与方法 | 第66-69页 |
| ·实验材料 | 第66-67页 |
| ·载体构建 | 第67页 |
| ·ZmWRKY4干扰引物的设计 | 第67页 |
| ·ZmWRKY4的dsRNA体外合成 | 第67页 |
| ·质粒的大量提取 | 第67页 |
| ·玉米原生质体的分离及转化 | 第67页 |
| ·玉米叶片总RNA的提取 | 第67页 |
| ·玉米原生质体总RNA的提取 | 第67-68页 |
| ·cDNA第一条链的合成 | 第68页 |
| ·Real-time荧光定量PCR | 第68页 |
| ·玉米原生质体的H_2O_2染色 | 第68页 |
| ·原生质体中超氧物歧化酶(SOD)的测定 | 第68页 |
| ·原生质体中抗坏血酸过氧化物酶(APX)的测定 | 第68-69页 |
| 2 结果与分析 | 第69-74页 |
| ·利用原生质体瞬时表达体系研究ABA诱导下,ZmWRKY4与ZmMPK5的关系 | 第69-70页 |
| ·ZmWRKY4与ZmMPK5对于原生质体中H_2O_2积累的影响 | 第70-72页 |
| ·ZmWRKY4与ZmMPK5在ABA诱导的抗氧化防护中的作用 | 第72-74页 |
| 3 讨论 | 第74-77页 |
| 第五章 全文总结 | 第77-79页 |
| 1 研究小结 | 第77页 |
| ·ZmWRKY4和ZmMPK5相互作用的鉴定 | 第77页 |
| ·ZmWRKY4是ZmMPK5的磷酸化底物 | 第77页 |
| ·ZmWRKY4基因对于玉米中活性氧ROS积累的影响 | 第77页 |
| ·ABA信号通路中ZmWRKY4与ZmMPK5的关系 | 第77页 |
| 2 创新之处 | 第77-78页 |
| ·证明了ZmWRKY4和ZmMPK5相互作用的真实性,并证明了ZmWRKY4是ZmMPK5的磷酸化底物 | 第77-78页 |
| ·证明了ZmWRKY4基因参与ABA诱导的抗氧化防护 | 第78页 |
| ·证实了在ABA信号通路中,ZmMPK5基因位于ZmWRKY4的上游 | 第78页 |
| 3 存在的问题 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-89页 |
| 致谢 | 第89页 |
