| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 缩略语表（Abbreviation） | 第10-12页 |
| 第1章 文献综述 | 第12-22页 |
| ·猪流行性腹泻的研究进展 | 第12-19页 |
| ·猪流行性腹泻的病原学 | 第12-17页 |
| ·猪流行性腹泻的流行病学 | 第17-18页 |
| ·猪流行性腹泻的临床症状和病理变化 | 第18页 |
| ·猪流行性腹泻的诊断和防治 | 第18-19页 |
| ·酵母双杂交技术概述 | 第19-22页 |
| ·酵母双杂交技术的基本原理 | 第19-20页 |
| ·酵母双杂交技术的优点和存在的局限 | 第20页 |
| ·酵母双杂交系统的应用 | 第20-22页 |
| 第2章 研究目的与意义 | 第22-23页 |
| 第3章 材料与方法 | 第23-42页 |
| ·实验材料 | 第23-28页 |
| ·细胞、菌株 | 第23页 |
| ·质粒与载体 | 第23-24页 |
| ·工具酶及主要试剂 | 第24-25页 |
| ·Western Blot以及Co-IP实验所需材料 | 第25页 |
| ·主要缓冲液和相关试剂的配置 | 第25-28页 |
| ·主要实验仪器及设备 | 第28页 |
| ·分子生物学分析软件 | 第28页 |
| ·实验方法 | 第28-42页 |
| ·质粒的构建及引物设计 | 第28-31页 |
| ·细胞样品总RNA的提取和RT-PCR | 第31-32页 |
| ·目的序列的PCR扩增 | 第32-33页 |
| ·PCR产物或酶切产物的回收和纯化 | 第33页 |
| ·外源DNA片段与质粒载体的连接反应 | 第33页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备（氯化钙法） | 第33-34页 |
| ·连接产物的转化 | 第34页 |
| ·质粒的制备与鉴定 | 第34-35页 |
| ·酵母感受态细胞的制备及转化 | 第35-36页 |
| ·酵母表达质粒的自激活活性和毒性检测 | 第36页 |
| ·酵母回复杂交验证实验 | 第36页 |
| ·酵母双杂交cDNA文库的构建 | 第36-38页 |
| ·利用酵母双杂交系统筛选cDNA文库 | 第38-39页 |
| ·酵母质粒抽提 | 第39页 |
| ·质粒的转染（脂质体介导的瞬时转染法） | 第39页 |
| ·Western Blot检测目的基因在真核细胞中的互作 | 第39-41页 |
| ·间接免疫荧光共聚焦检测蛋白质的亚细胞定位 | 第41-42页 |
| 第4章 结果与分析 | 第42-54页 |
| ·PEDV各基因酵母表达质粒自激活活性和毒性检测 | 第42页 |
| ·利用酵母双杂交系统检测PEDV蛋白间的相互作用 | 第42-44页 |
| ·猪小肠上皮细胞酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定 | 第44-46页 |
| ·猪小肠上皮细胞总RNA的提取及鉴定 | 第44-45页 |
| ·LD-PCR扩增ds-cDNA并纯化 | 第45-46页 |
| ·猪小肠上皮细胞酵母双杂交cDNA文库的建立及鉴定 | 第46页 |
| ·nsp14、nsp16筛选猪小肠上皮细胞酵母双杂交cDNA文库 | 第46-48页 |
| ·酵母回复杂交实验验证nsp14、nsp16与宿主蛋白的相互作用 | 第48-51页 |
| ·免疫共沉淀实验验证nsp14、nsp16与宿主蛋白的相互作用 | 第51-52页 |
| ·间接免疫荧光实验验证nsp16与DDIT4、UBE2K的共定位 | 第52-54页 |
| 第5章 讨论与结论 | 第54-57页 |
| ·利用酵母双杂交技术筛选PEDV蛋白间的相互作用 | 第54-55页 |
| ·构建猪小肠上皮细胞酵母双杂交cDNA文库 | 第55页 |
| ·nsp14、nsp16筛选猪小肠上皮细胞cDNA文库 | 第55-56页 |
| ·结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
