| 中文摘要 | 第1-16页 |
| 英文摘要 | 第16-19页 |
| 第一章 绪论 | 第19-59页 |
| 第一节 程序性细胞死亡的分子机制 | 第19-38页 |
| 一、细胞凋亡及其分子机制 | 第19-32页 |
| 1.细胞凋亡的概念及特征 | 第19-20页 |
| 2.细胞凋亡的一些调控因素 | 第20-29页 |
| ·活性氧 | 第20-21页 |
| ·Caspase蛋白酶 | 第21-25页 |
| ·凋亡启动亚类caspases-9的调节作用 | 第22-24页 |
| ·凋亡启动亚类caspases-8的调节作用 | 第24-25页 |
| ·凋亡效应亚类caspase-3的调节作用 | 第25页 |
| ·Bcl-2家族成员 | 第25-27页 |
| ·凋亡诱导因子 | 第27页 |
| ·p53蛋白 | 第27-28页 |
| ·SIRT1去乙酰化酶 | 第28-29页 |
| 3.细胞凋亡的信号转导途径 | 第29-31页 |
| ·线粒体途径 | 第29-30页 |
| ·死亡受体途径 | 第30-31页 |
| 4.细胞凋亡与肿瘤 | 第31-32页 |
| 二、细胞自噬及其分子机制 | 第32-38页 |
| 1.自噬的概念及功能 | 第32页 |
| 2.自噬的分类 | 第32-33页 |
| 3.自噬的调控因素 | 第33-34页 |
| ·Beclinl在自噬中的功能 | 第33-34页 |
| ·MAP-LC3在自噬中的功能 | 第34页 |
| ·PI3K对自噬通路的调控 | 第34页 |
| 4.自噬与凋亡 | 第34-37页 |
| ·自噬与凋亡相互拮抗 | 第35-36页 |
| ·抑制凋亡促进自噬 | 第35页 |
| ·抑制自噬促进凋亡 | 第35-36页 |
| ·自噬与凋亡相互促进 | 第36页 |
| ·凋亡与自噬的共同调节因素 | 第36-37页 |
| ·ROS、神经酰、Ca~(2+) | 第36页 |
| ·ATG5 | 第36-37页 |
| 5.自噬与肿瘤 | 第37-38页 |
| 第二节 细胞周期调控及其分子机制 | 第38-42页 |
| 1.细胞周期的概念 | 第38页 |
| 2.细胞周期调控分子 | 第38-39页 |
| 3.细胞周期检查点 | 第39-41页 |
| 4.细胞周期阻滞与凋亡 | 第41-42页 |
| 5.细胞周期与肿瘤 | 第42页 |
| 第三节 蛋白酪氨酸激酶信号转导途径及其相关研究 | 第42-45页 |
| 一、蛋白酪氨酸激酶的分类与功能 | 第42-43页 |
| 二、蛋白酪氨酸激酶细胞信号转导途径 | 第43-44页 |
| 1.受体酪氨酸激酶信号转导 | 第43页 |
| 2.非受体酪氨酸激酶信号转导 | 第43-44页 |
| 三、蛋白酪氨酸激酶信号转导途径与抗肿瘤药物 | 第44-45页 |
| 第四节 人喉鳞状细胞癌分子细胞遗传学研究进展 | 第45-46页 |
| 1.癌基因 | 第45-46页 |
| 2.抑癌基因 | 第46页 |
| 第五节 抗肿瘤药物研究进展 | 第46-48页 |
| 第六节 冬凌草甲素及其药理作用 | 第48-50页 |
| 参考文献 | 第50-59页 |
| 第二章 冬凌草甲素通过产生活性氧及诱导凋亡与G2肿期阻滞抑制人喉鳞状细胞癌HEp-2细胞生长 | 第59-86页 |
| 一、实验材料与方法 | 第59-64页 |
| 1.实验材料 | 第59-61页 |
| ·细胞 | 第59-60页 |
| ·药品及试剂 | 第60页 |
| ·仪器 | 第60-61页 |
| 2.实验方法 | 第61-64页 |
| ·细胞培养 | 第61页 |
| ·MTT法测定细胞生长抑制率 | 第61页 |
| ·相差显微镜观察细胞形态 | 第61页 |
| ·电镜观察细胞形态 | 第61-62页 |
| ·AO染色观察细胞核损伤 | 第62页 |
| ·线粒体膜电位观察 | 第62页 |
| ·细胞内ROS含量测定 | 第62页 |
| ·流式细胞术分析细胞周期及凋亡比率 | 第62-63页 |
| ·Western blot免疫印迹法 | 第63-64页 |
| ·数据统计分析 | 第64页 |
| 二、实验结果 | 第64-76页 |
| 1.冬凌草甲素对HEp-2细胞的生长抑制作用 | 第64-65页 |
| 2.冬凌草甲素诱导HEp-2细胞凋亡的形态学变化 | 第65-66页 |
| 3.流式细胞术测定冬凌草甲素诱导HEp-2细胞发生凋亡及G_2/M期阻滞 | 第66-67页 |
| 4.冬凌草甲素引起细胞内ROS早期产生,产生的ROS可介导细胞凋亡和周期阻滞 | 第67-69页 |
| 5.抑制ROS的产生可以挽救冬凌草甲素引起的线粒体膜电位的丧失 | 第69-71页 |
| 6.冬凌草甲素引起的Bax活化、Bcl-2降解以及cytochrome c、AIF表达量增加可被NAC或CAT所抑制 | 第71-73页 |
| 7.冬凌草甲素引起的caspase-3的剪切,ICAD的裂解可被NAC或CAT所抑制,而caspase-9前体的表达量没有发生变化 | 第73-74页 |
| 8.分析介导G_2/M周期阻滞的重要效应分子 | 第74-76页 |
| 三、讨论 | 第76-79页 |
| 四、小结 | 第79-81页 |
| 参考文献 | 第81-86页 |
| 第三章 抑制EGFR信号途径增强冬凌草甲素诱导的HEp-2细胞凋亡 | 第86-114页 |
| 一、实验材料与方法 | 第86-90页 |
| 1.实验材料 | 第86-87页 |
| ·细胞 | 第86页 |
| ·药品及试剂 | 第86-87页 |
| ·仪器 | 第87页 |
| 2.实验方法 | 第87-90页 |
| ·细胞培养 | 第87-88页 |
| ·MTT法测定细胞生长抑制率 | 第88页 |
| ·AO染色观察细胞核损伤 | 第88页 |
| ·流式细胞术分析凋亡比率 | 第88页 |
| ·细胞内ROS含量测定 | 第88页 |
| ·线粒体膜电位观察 | 第88页 |
| ·核提取物的制备 | 第88-89页 |
| ·Western blot免疫印迹法 | 第89-90页 |
| ·数据统计分析 | 第90页 |
| 二、实验结果 | 第90-104页 |
| 1.抑制EGFR信号途径增强冬凌草甲素诱导的HEp-2细胞凋亡及生长抑制 | 第90-93页 |
| 2.抑制EGFR通过扩大ROS的产生增强冬凌草甲素诱导的HEp-2细胞凋亡 | 第93-95页 |
| 3.抑制EGFR加剧冬凌草甲素诱导的线粒体膜电位丧失,而清除ROS可以明显阻止线粒体膜电位丧失 | 第95-97页 |
| 4.联合使用AG1478和冬凌草甲素对EGFR活性的影响 | 第97-98页 |
| 5.冬凌草甲素诱导的Bax激活,Bcl-2降解及SIRT1失活可被AG1478进一步增强,但被NAC抑制 | 第98-100页 |
| 6.抑制EGFR促进冬凌草甲素诱导的AIF核转位,而ROS参与调节此过程 | 第100-101页 |
| 7.冬凌草甲素引起的FADD的募集、caspase-8前体的剪切以及caspase-3的激活,可被AG1478促进,但被NAC抑制 | 第101-102页 |
| 8.抑制EGFR促进冬凌草甲素诱导的PARP、ICAD的裂解,而ROS参与调节此过程 | 第102-104页 |
| 三、讨论 | 第104-107页 |
| 四、小结 | 第107-109页 |
| 参考文献 | 第109-114页 |
| 第四章 冬凌草甲素诱导人喉鳞状细胞癌HEp-2细胞凋亡过程中caspase-9保护性机制研究 | 第114-148页 |
| 一、实验材料与方法 | 第114-120页 |
| 1.实验材料 | 第114-116页 |
| ·细胞 | 第114-115页 |
| ·药品及试剂 | 第115页 |
| ·仪器 | 第115-116页 |
| 2.实验方法 | 第116-120页 |
| ·细胞培养 | 第116页 |
| ·MTT法测定细胞生长抑制率 | 第116页 |
| ·相差显微镜观察细胞形态 | 第116页 |
| ·细胞内ROS含量测定 | 第116页 |
| ·线粒体膜电位观察 | 第116页 |
| ·流式细胞术分析凋亡比率 | 第116-117页 |
| ·电镜观察细胞形态 | 第117页 |
| ·荧光显微镜观察和流式细胞仪分析MDC荧光染色 | 第117页 |
| ·AO染色观察细胞核损伤 | 第117页 |
| ·线粒体和胞浆提取物的制备 | 第117-118页 |
| ·Caspase-9活力测定 | 第118页 |
| ·siRNA转染 | 第118页 |
| ·Western blot免疫印迹法 | 第118-119页 |
| ·数据统计分析 | 第119-120页 |
| 二、实验结果 | 第120-140页 |
| 1.Caspase对冬凌草甲素诱导的HEp-2细胞生长抑制的调控作用 | 第120-121页 |
| 2.抑制caspase-9增强冬凌草甲素诱导的HEp-2细胞凋亡 | 第121-123页 |
| 3.抑制caspase-9通过扩大ROS的产生增强冬凌草甲素诱导的HEp-2细胞凋亡 | 第123-125页 |
| 4.抑制caspase-9加剧冬凌草甲素诱导的线粒体膜电位丧失 | 第125-127页 |
| 5.冬凌草甲素诱导HEp-2细胞自噬 | 第127-130页 |
| 6.抑制自噬促进冬凌草甲素诱导的细胞凋亡 | 第130-133页 |
| 7.Caspase-9可增强冬凌草甲素诱导的细胞自噬 | 第133-135页 |
| 8.分析凋亡蛋白酶复合体相关蛋白的表达 | 第135-136页 |
| 9.Caspase-9在冬凌草甲素作用下被激活 | 第136页 |
| 10. Caspase-9缺陷的HEp-2细胞对冬凌草甲素敏感性增强 | 第136-140页 |
| 三、讨论 | 第140-143页 |
| 四、小结 | 第143-145页 |
| 参考文献 | 第145-148页 |
| 缩略语说明 | 第148-151页 |
| 致谢 | 第151-152页 |
| 附录 | 第152-171页 |
