| 致谢 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| ABSTRACT | 第9-13页 |
| 插图清单 | 第13-15页 |
| 表格清单 | 第15-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-22页 |
| ·环糊精的简介 | 第16-18页 |
| ·环糊精的结构及其性质 | 第16-17页 |
| ·环糊精的应用及安全性评价 | 第17页 |
| ·环糊精的生产及发展现状 | 第17-18页 |
| ·环糊精糖基转移酶的概述 | 第18-20页 |
| ·环糊精糖基转移酶的来源和分类 | 第18页 |
| ·环糊精糖基转移酶的性质 | 第18-19页 |
| ·环糊精糖基转移酶的研究进展 | 第19-20页 |
| ·本课题的立项依据和研究意义 | 第20-21页 |
| ·本课题研究内容与思路 | 第21-22页 |
| 第二章 β-环糊精糖基转移酶诱导型工程菌的构建及表达 | 第22-35页 |
| ·引言 | 第22页 |
| ·实验材料和试剂 | 第22-24页 |
| ·实验材料 | 第22页 |
| ·培养基 | 第22-23页 |
| ·溶液 | 第23页 |
| ·主要试剂和设备 | 第23-24页 |
| ·实验方法 | 第24-28页 |
| ·质粒提取 | 第24页 |
| ·PCR 产物纯化 | 第24-25页 |
| ·DNA 胶回收 | 第25页 |
| ·E.coli DH5α感受态制备 | 第25页 |
| ·重组质粒的转化 | 第25-26页 |
| ·引物设计 | 第26页 |
| ·pBV220-β-CGTase 质粒提取 | 第26页 |
| ·β-环糊精糖基转移酶基因 PCR 扩增 | 第26页 |
| ·β-环糊精糖基转移酶基因 PCR 产物纯化和酶切 | 第26-27页 |
| ·pET-22b 质粒提取 | 第27页 |
| ·pET-22b 质粒酶切及回收 | 第27页 |
| ·目的基因与载体连接 | 第27-28页 |
| ·连接产物转入感受态 | 第28页 |
| ·阳性克隆的筛选及验证 | 第28页 |
| ·β-环糊精糖基转移酶表达菌株的构建及其表达检测 | 第28页 |
| ·酶活力的测定 | 第28页 |
| ·结果与讨论 | 第28-34页 |
| ·温控型质粒 pBV220-β-CGTase 和 pET22b 质粒提取 | 第28-29页 |
| ·β-环糊精糖基转移酶基因扩增 | 第29页 |
| ·pET22b 质粒和目的基因双酶切 | 第29-30页 |
| ·阳性克隆的筛选及验证 | 第30-33页 |
| ·重组β-环糊精糖基转移酶的表达 | 第33-34页 |
| ·本章小结 | 第34-35页 |
| 第三章 重组β-环糊精糖基转移酶发酵条件的研究 | 第35-43页 |
| ·引言 | 第35页 |
| ·实验材料和试剂 | 第35-36页 |
| ·实验材料 | 第35页 |
| ·培养基 | 第35页 |
| ·主要试剂和设备 | 第35-36页 |
| ·实验方法 | 第36-38页 |
| ·诱导温度对重组酶活力的影响 | 第36页 |
| ·化合物对重组酶活力的影响 | 第36页 |
| ·不同氮源对重组酶活力的影响 | 第36-37页 |
| ·不同碳源对重组酶活力的影响 | 第37页 |
| ·诱导开始时菌浓(OD600)对重组酶活力的影响 | 第37页 |
| ·IPTG 浓度对重组酶活力的影响 | 第37-38页 |
| ·诱导时间对重组酶活力的影响 | 第38页 |
| ·结果与讨论 | 第38-42页 |
| ·诱导温度对重组酶活力的影响 | 第38页 |
| ·化合物对重组酶活力的影响 | 第38-39页 |
| ·不同氮源对重组酶活力的影响 | 第39页 |
| ·不同碳源对重组酶活力的影响 | 第39-40页 |
| ·诱导开始时菌浓(OD600)对重组酶活力的影响 | 第40-41页 |
| ·IPTG 浓度对重组酶活力的影响 | 第41页 |
| ·诱导时间对重组酶活力的影响 | 第41-42页 |
| ·本章小结 | 第42-43页 |
| 第四章 β-环糊精糖基转移酶的分离纯化及酶学性质研究 | 第43-54页 |
| ·引言 | 第43页 |
| ·实验材料 | 第43-44页 |
| ·实验菌株 | 第43页 |
| ·主要实验试剂和设备 | 第43-44页 |
| ·重组酶的分离纯化 | 第44-45页 |
| ·粗酶液的制备 | 第44页 |
| ·硫酸铵盐析 | 第44页 |
| ·透析 | 第44页 |
| ·Sephadex G-100 凝胶柱层析 | 第44页 |
| ·考马斯亮蓝测蛋白含量 | 第44-45页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白分子量 | 第45页 |
| ·重组酶的酶学性质 | 第45-46页 |
| ·重组酶的最适反应温度和 pH | 第45页 |
| ·重组酶的温度稳定性和 pH 稳定性 | 第45-46页 |
| ·金属离子对酶活力的影响 | 第46页 |
| ·动力学常数 Km 及 Vmax 的测定 | 第46页 |
| ·重组酶对不同多糖的水解作用 | 第46页 |
| ·结果与讨论 | 第46-53页 |
| ·Sephadex G-100 凝胶柱层析 | 第46-47页 |
| ·考马斯亮蓝测蛋白浓度标准曲线制作 | 第47-48页 |
| ·重组酶的纯化结果 | 第48页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第48-49页 |
| ·温度对重组酶活力的影响 | 第49页 |
| ·pH 对重组酶活力的影响 | 第49-50页 |
| ·重组酶的温度稳定性 | 第50页 |
| ·重组酶的 pH 稳定性 | 第50-51页 |
| ·金属离子对重组酶活力的影响 | 第51-52页 |
| ·重组酶动力学常数 Km 及 Vmax 的测定 | 第52页 |
| ·重组酶对不同多糖的水解作用 | 第52-53页 |
| ·本章小结 | 第53-54页 |
| 第五章 重组β-环糊精糖基转移酶催化产物研究 | 第54-63页 |
| ·引言 | 第54页 |
| ·实验材料和试剂 | 第54-55页 |
| ·实验材料 | 第54页 |
| ·溶液 | 第54页 |
| ·主要试剂和设备 | 第54-55页 |
| ·实验方法 | 第55-56页 |
| ·重组酶对不同淀粉的降解作用 | 第55页 |
| ·重组酶催化可溶性淀粉产物的硅胶板薄层色谱分析 | 第55页 |
| ·重组酶催化可溶性淀粉产物的荧光辅助糖电泳分析 | 第55-56页 |
| ·重组酶催化可溶性淀粉产物的高效液相分析 | 第56页 |
| ·反应 pH 对催化产物环糊精转化率的影响 | 第56页 |
| ·反应温度对催化产物环糊精转化率的影响 | 第56页 |
| ·反应酶浓度对催化产物环糊精转化率的影响 | 第56页 |
| ·结果与讨论 | 第56-62页 |
| ·重组酶对不同淀粉的降解作用 | 第56-57页 |
| ·重组酶催化可溶性淀粉产物的硅胶板薄层色谱分析 | 第57-58页 |
| ·重组酶催化可溶性淀粉产物的荧光辅助糖电泳分析 | 第58页 |
| ·环糊精含量标准曲线的制作 | 第58-60页 |
| ·重组酶催化可溶性淀粉产物的高效液相分析 | 第60页 |
| ·反应 pH 对催化产物环糊精转化率的影响 | 第60-61页 |
| ·反应温度对催化产物环糊精转化率的影响 | 第61页 |
| ·反应酶浓度对催化产物环糊精转化率的影响 | 第61-62页 |
| ·本章小结 | 第62-63页 |
| 第六章 结论与展望 | 第63-65页 |
| ·结论 | 第63页 |
| ·展望 | 第63-65页 |
| 参考文献 | 第65-70页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第70-71页 |
