| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-21页 |
| 英文缩略表 | 第21-23页 |
| 前言 | 第23-28页 |
| 第一章 辅助依赖型腺病毒介导的人类ZNF403基因RNA干扰系统的构建和鉴定 | 第28-55页 |
| 技术路线 | 第29-30页 |
| 第一节 材料与方法 | 第30-39页 |
| 1. 材料 | 第30-32页 |
| ·细胞 | 第30页 |
| ·试剂 | 第30-31页 |
| ·仪器 | 第31-32页 |
| ·载体和细菌 | 第32页 |
| ·引物及合成DNA片段 | 第32页 |
| 2. 方法 | 第32-39页 |
| ·质粒pC4HSU-HDAd-ZNF403-shRNA构建 | 第32-33页 |
| ·酶切 | 第33页 |
| ·酶切产物的回收纯化 | 第33页 |
| ·连接反应 | 第33-34页 |
| ·重组质粒的转化 | 第34页 |
| ·重组质粒的制备 | 第34-35页 |
| ·C4HSU-HDAd-ZNF403-shRNA病毒的制备 | 第35-38页 |
| ·HDAd病毒的感染 | 第38页 |
| ·HDAd的Southern Blot检测 | 第38页 |
| ·RNA干扰效率的检测 | 第38-39页 |
| 第二节 实验结果 | 第39-52页 |
| ·ZNF403的基因结构与同源性分析 | 第39-40页 |
| ·ZNF403在不同人类细胞株中的表达与定位分析 | 第40-43页 |
| ·RNA干扰载体的设计和构建 | 第43-48页 |
| ·辅助依赖型腺病毒(HDAd-ZNF403-shRNA)的大量制备 | 第48-49页 |
| ·HDAd-ZNF403-shRNA在细胞中高效抑制内源性ZNF403的表达 | 第49-51页 |
| ·HDAd-ZNF403-shRNA对LCRG1表达不产生干扰影响 | 第51页 |
| ·HD-Ad-ZNF403-shRNA抑制外源性ZNF403表达 | 第51-52页 |
| 第三节 分析和讨论 | 第52-55页 |
| 第二章 ZNF403基因表达沉默后的肿瘤生物学特性研究 | 第55-67页 |
| 技术路线 | 第56页 |
| 第一节 材料与方法 | 第56-58页 |
| 1. 材料 | 第56页 |
| ·细胞 | 第56页 |
| ·实验动物 | 第56页 |
| ·试剂 | 第56页 |
| 2. 方法 | 第56-58页 |
| ·Brdu细胞增殖ELISA实验 | 第57页 |
| ·软琼脂集落形成实验 | 第57页 |
| ·细胞划痕试验 | 第57页 |
| ·裸鼠体内成瘤 | 第57-58页 |
| 第二节 实验结果 | 第58-63页 |
| 1. ZNF403基因表达沉默在体外抑制细胞的生长增殖 | 第58-59页 |
| 2. ZNF403基因表达沉默抑制肿瘤细胞的锚定非依赖性生长特性 | 第59-61页 |
| 3. ZNF403基因的表达沉默抑制肿瘤细胞的迁移特性 | 第61-62页 |
| 4. ZNF403基因表达沉默在小鼠体内抑制肿瘤细胞的生长 | 第62-63页 |
| 第三节 分析与讨论 | 第63-67页 |
| 第三章 ZNF403表达沉默后抑瘤机制的研究 | 第67-96页 |
| 技术路线 | 第68-69页 |
| 第一节 材料和方法 | 第69-73页 |
| 1. 材料 | 第69页 |
| ·细胞 | 第69页 |
| ·试剂 | 第69页 |
| ·仪器 | 第69页 |
| 2. 方法 | 第69-73页 |
| ·生物信息学功能域预测分析 | 第69-70页 |
| ·流式细胞术细胞周期分析 | 第70-71页 |
| ·Human Cell cycle PCR array人类细胞周期PCR array | 第71-72页 |
| ·Western blot蛋白印迹实验 | 第72-73页 |
| 第二节 实验结果 | 第73-91页 |
| 1. ZNF403功能域的生物信息学分析提示多个细胞周期相关蛋白结合功能域存在 | 第73-75页 |
| 2. ZNF403基因表达下调导致G2/M期阻滞 | 第75-82页 |
| ·PI标记所示ZNF403表达下调导致细胞周期G2/M期阻滞,且呈剂量相关 | 第76-77页 |
| ·ZNF403表达抑制后细胞周期变化的时间效应 | 第77-78页 |
| ·BrdU标记动态分析ZNF403表达抑制导致细胞周期G2/M期阻滞 | 第78-82页 |
| 3. ZNF403表达下调导致细胞周期改变的分子机理研究 | 第82-91页 |
| 第三节 分析与讨论 | 第91-96页 |
| 第四章 ZNF403基因上游转录调控机制的初步研究 | 第96-120页 |
| 第一节 材料和方法 | 第97-105页 |
| 1. 材料 | 第97-98页 |
| ·细胞 | 第97页 |
| ·菌株和载体 | 第97页 |
| ·试剂 | 第97-98页 |
| ·仪器 | 第98页 |
| 2. 方法 | 第98-105页 |
| ·ZNF403基因5’-端序列及调控序列的生物信息学分析 | 第98-100页 |
| ·构建启动子缺失体荧光素酶报告基因 | 第100-105页 |
| ·ZNF403启动子区Luc报告基因载体活性检测 | 第105页 |
| ·TCDD对ZNF403启动子的调控 | 第105页 |
| 第二节 实验结果 | 第105-115页 |
| 1. ZNF403启动子候选位置的生物信息学分析结果 | 第105-110页 |
| 2. 构建启动子缺失体及启动子活性检测 | 第110-113页 |
| 3. TCDD在人细胞中对ZNF403诱导作用的研究 | 第113-115页 |
| 第三节 分析和讨论 | 第115-120页 |
| 结论 | 第120-121页 |
| 参考文献 | 第121-133页 |
| 致谢 | 第133-135页 |
| 攻读学位期间主要的研究成果 | 第135页 |
