| 中文摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-11页 |
| 缩略词表 | 第11-16页 |
| 第一章 前言 | 第16-38页 |
| 一.Rspo1与性别决定 | 第16-25页 |
| 1.R-spondins结构与功能 | 第16-17页 |
| 2.Rspo1与性别决定 | 第17-25页 |
| ·Rspo1参与调控性腺发育 | 第17-19页 |
| ·Rspo1与雌性发育 | 第17页 |
| ·Rspo1与生殖细胞发育 | 第17-18页 |
| ·Rspo1与体细胞发育 | 第18页 |
| ·Sox9与β-catenin信号通路间的平衡决定性腺发育的方向 | 第18-19页 |
| ·Rspo1在性腺中的表达情况 | 第19-23页 |
| ·Rspo1在小鼠性腺中的表达 | 第19-20页 |
| ·Rspo1在鸡性腺中的表达 | 第20-22页 |
| ·Rspo1在龟性腺中的表达 | 第22-23页 |
| ·Rspo1通过激活β-catenin信号通路决定性别发育 | 第23-25页 |
| ·Rspo1激活经典β-catenin信号通路 | 第23-24页 |
| ·β-catenin信号通路与性别发育 | 第24页 |
| ·Rspo1通过激活β-catenin信号通路决定性别发育 | 第24-25页 |
| ·激活的β-catenin信号通路使Cox-2表达上调 | 第25页 |
| 二.斑马鱼性腺的发育 | 第25-36页 |
| 1.斑马鱼的性腺发育过程 | 第26-27页 |
| 2.内分泌调控斑马鱼卵巢的发育 | 第27-36页 |
| ·斑马鱼卵巢的形成 | 第27页 |
| ·促性腺激素分泌激素的作用 | 第27-28页 |
| ·卵巢滤泡的发育 | 第28-30页 |
| ·卵黄生成 | 第30-33页 |
| ·卵母细胞成熟 | 第33-36页 |
| ·LH促进卵母细胞成熟 | 第33-35页 |
| ·MIH(成熟诱导激素)促进卵母细胞成熟 | 第35-36页 |
| ·MPF(成熟促进因子)促进卵母细胞成熟 | 第36页 |
| 三.概述 | 第36-37页 |
| 四.本研究的目的和意义 | 第37-38页 |
| 第二章 斑马鱼Rspo1基因的克隆及斑马鱼Rspo1蛋白的亚细胞定位分析 | 第38-60页 |
| 一.实验材料与方法 | 第38-51页 |
| 1.材料 | 第38-39页 |
| ·实验动物 | 第38页 |
| ·细胞系 | 第38-39页 |
| ·引物 | 第39页 |
| 2.器材与试剂 | 第39-43页 |
| ·试剂 | 第39-42页 |
| ·器材 | 第42-43页 |
| 3.实验方法 | 第43-51页 |
| ·RNA提取及逆转录 | 第43-45页 |
| ·RNA提取 | 第43-44页 |
| ·37℃消化基因组DNA | 第44页 |
| ·RNA醇沉 | 第44页 |
| ·逆转录 | 第44-45页 |
| ·CaCl_2感受态细胞的制备 | 第45-46页 |
| ·zRspo1基因的克隆 | 第46-47页 |
| ·zRspo1-1扩增 | 第46页 |
| ·zRspo1-1克隆入PMD18-T vector | 第46-47页 |
| ·zRspo1-1克隆入大肠杆菌 | 第47页 |
| ·zRspo1-2检测 | 第47页 |
| ·zRspo1-GFP融合载体的构建 | 第47-49页 |
| ·zRspo1-CFP的构建 | 第47-48页 |
| ·去内毒素质粒DNA提取 | 第48-49页 |
| ·磷酸钙转染法转染细胞 | 第49-50页 |
| ·脂质体法转染细胞 | 第50-51页 |
| 4.数据分析 | 第51页 |
| 二.结果与讨论 | 第51-60页 |
| 1.克隆斑马鱼Rspo1基因 | 第51-56页 |
| ·物种间Rspo1的序列比对与同源性分析 | 第51-54页 |
| ·zRspo1克隆 | 第54-56页 |
| 2.zRspo1蛋白的亚细胞定位 | 第56-60页 |
| ·zRspo1-GFP和zRspo1-his的构建 | 第56-58页 |
| ·zRspo1-GFP构建过程 | 第56-57页 |
| ·zRspo1-his构建过程 | 第57-58页 |
| ·zRspo1蛋白的亚细胞定位分析 | 第58-60页 |
| 第三章 zRspo1与斑马鱼性别发育相关性分析 | 第60-75页 |
| 一.实验材料与方法 | 第60-67页 |
| 1.材料 | 第60页 |
| ·实验动物 | 第60页 |
| ·real-time PCR引物 | 第60页 |
| 2.器材与试剂 | 第60-63页 |
| ·试剂 | 第60-63页 |
| ·器材 | 第63页 |
| 3.实验方法 | 第63-67页 |
| ·RNA提取及反转录 | 第63页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第63-64页 |
| ·zRspo1特异RNA探针的制备 | 第64-65页 |
| ·模板制备 | 第64页 |
| ·RNA探针制备 | 第64-65页 |
| ·RNA探针检测 | 第65页 |
| ·冰冻切片 | 第65-66页 |
| ·原位杂交 | 第66-67页 |
| ·免疫组化 | 第67页 |
| 4.数据分析 | 第67页 |
| 二.结果与讨论 | 第67-75页 |
| 1.zRspo1可能调节PGCs的发育 | 第67-69页 |
| 2.zRspo1可能调节生殖细胞的发育及体细胞的分化 | 第69-73页 |
| 3.zRspo1在斑马鱼雌雄性个体器官中的表达有差异 | 第73-75页 |
| 第四章 zRspo1与斑马鱼卵巢滤泡发育调控关系的讨论 | 第75-90页 |
| 一.实验材料与方法 | 第75-77页 |
| 1.材料 | 第75页 |
| ·实验动物 | 第75页 |
| ·real-time PCR引物或寡核苷酸 | 第75页 |
| 2.器材与试剂 | 第75-76页 |
| 3.实验方法 | 第76-77页 |
| ·Rspo1-RNAi干扰载体构建 | 第76页 |
| ·zβ-cateninl-RFP载体构建 | 第76页 |
| ·斑马鱼卵巢原代滤泡细胞培养 | 第76-77页 |
| ·RNA提取及反转录 | 第77页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第77页 |
| ·Elisa检测细胞上清液中雌激素的含量 | 第77页 |
| ·hCG刺激体外培养的斑马鱼卵巢滤泡细胞 | 第77页 |
| 4.数据分析 | 第77页 |
| 二.实验结果与讨论 | 第77-90页 |
| 1. zRspol激活β-catenin信号通路 | 第77-81页 |
| ·构建斑马鱼β-catenin1-RFP融合载体 | 第77-78页 |
| ·zRspo1对β-catenin在细胞核内积累作用的探讨 | 第78-80页 |
| ·zRspo1激活cox-2表达 | 第80-81页 |
| 2. zRspo1调控斑马鱼卵巢内cox-2的表达 | 第81-86页 |
| ·斑马鱼滤泡发育过程中zRspo1、cox-2的表达变化趋势相似 | 第81-82页 |
| ·zRspo1调控斑马鱼卵巢内cox-2的表达 | 第82-83页 |
| ·睾丸激素抑制卵巢中zRspo1和cox-2的表达 | 第83-84页 |
| ·讨论 | 第84-86页 |
| 3. zRspo1调控雌激素合成 | 第86-90页 |
| ·无hCG刺激时zRspo1抑制cyp19a1a表达和雌激素合成 | 第86-88页 |
| ·hCG刺激下zRspo1促进cyp19a1a表达 | 第88-89页 |
| ·讨论 | 第89-90页 |
| 总结 | 第90-92页 |
| 参考文献 | 第92-108页 |
| 在读期间所发表的论文及奖励 | 第108-109页 |
| 致谢 | 第109页 |
