| 本研究创新点 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 目录 | 第10-14页 |
| 第一章 前言 | 第14-50页 |
| ·极端环境微生物 | 第14-17页 |
| ·极端环境微生物的分类 | 第14-15页 |
| ·极端环境微生物的适应机制 | 第15-16页 |
| ·极端酶 | 第16-17页 |
| ·高温放线菌 | 第17-20页 |
| ·高温放线菌的分类 | 第17-19页 |
| ·高温放线菌产生的蛋白酶 | 第19-20页 |
| ·高温放线菌的芽胞及致病性 | 第20页 |
| ·蛋白酶 | 第20-35页 |
| ·蛋白酶简介 | 第20-22页 |
| ·丝氨酸蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶家族 | 第22-26页 |
| ·嗜热蛋白酶和碱性蛋白酶 | 第26-28页 |
| ·角蛋白酶 | 第28-34页 |
| ·蛋白酶的成熟及加工 | 第34-35页 |
| ·外源蛋白的重组表达 | 第35-40页 |
| ·微生物表达系统 | 第35-37页 |
| ·包含体(inclusion bodies,IBs) | 第37-40页 |
| ·芽胞 | 第40-49页 |
| ·芽胞杆菌的细胞形态分化 | 第40-41页 |
| ·芽胞的结构 | 第41-43页 |
| ·芽胞的形成和萌发 | 第43-44页 |
| ·芽胞形成的Sigma因子调控 | 第44-45页 |
| ·芽胞衣的组装和功能 | 第45-47页 |
| ·芽胞相关蛋白酶的功能 | 第47-49页 |
| ·本研究的意义和内容 | 第49-50页 |
| 第二章 材料和方法 | 第50-76页 |
| ·实验材料 | 第50-56页 |
| ·菌种和质粒 | 第50-51页 |
| ·药品及试剂 | 第51-52页 |
| ·溶液配制 | 第52-55页 |
| ·仪器 | 第55-56页 |
| ·实验方法 | 第56-76页 |
| ·高温放线菌CDF的分离和培养 | 第56页 |
| ·高温放线菌CDF基因组的提取 | 第56-57页 |
| ·高温放线菌CDF芽胞的提取 | 第57页 |
| ·PCR | 第57-65页 |
| ·重组质粒的构建 | 第65-67页 |
| ·枯草芽胞杆菌的转化及质粒提取 | 第67页 |
| ·重组蛋白质的表达 | 第67-68页 |
| ·蛋白质纯化 | 第68-69页 |
| ·蛋白酶活性测定 | 第69-70页 |
| ·蛋白质凝胶电泳及定量分析 | 第70-71页 |
| ·胰岛素B链酶切图谱分析 | 第71页 |
| ·蛋白质N末端测序(N-terminus sequencing) | 第71-72页 |
| ·抗血清的制备 | 第72页 |
| ·Western Blot | 第72-73页 |
| ·蛋白质肽指纹图谱的样品制备 | 第73页 |
| ·透射电镜观察芽胞 | 第73-74页 |
| ·哺乳动物细胞转染 | 第74-75页 |
| ·ELISA(Enzyme Linked-Immuno-Sorbent Assay) | 第75-76页 |
| 第三章 高温放线菌CDF芽胞表面蛋白酶CDF的性质和功能研究 | 第76-114页 |
| ·高温放线菌CDF的分离及其芽胞的蛋白水解活性的测定 | 第76-78页 |
| ·蛋白酶CDF基因的克隆及序列分析 | 第78-83页 |
| ·蛋白酶CDF基因的克隆 | 第78-79页 |
| ·蛋白酶CDF氨基酸序列的同源比对分析和进化树构建 | 第79-81页 |
| ·蛋白酶CDF氨基酸序列的电荷分析 | 第81-83页 |
| ·蛋白酶CDF在大肠杆菌中的表达及纯化 | 第83-85页 |
| ·重组蛋白酶CDF的生化性质分析 | 第85-89页 |
| ·温度和pH以及盐浓度对重组蛋白酶CDF活性的影响 | 第85-87页 |
| ·重组蛋白酶CDF的底物特异性 | 第87-88页 |
| ·金属离子和化学试剂对重组蛋白酶CDF的影响 | 第88-89页 |
| ·重组蛋白酶CDF加工与成熟的分子机制研究 | 第89-95页 |
| ·蛋白酶CDF成熟的两步加工机制 | 第89-91页 |
| ·N端前肽对蛋白酶CDF的活性与加工的影响 | 第91-92页 |
| ·蛋白酶CDF的加工具有pH依赖性 | 第92-95页 |
| ·蛋白酶CDF在高温放线菌CDF中的定位和性质研究 | 第95-98页 |
| ·蛋白酶CDF在高温放线菌CDF中的定位分析 | 第95-97页 |
| ·芽胞表面蛋白酶CDF的性质分析 | 第97-98页 |
| ·蛋白酶CDF在芽胞的形成和萌发中的功能的初步研究 | 第98-103页 |
| ·蛋白酶CDF对高温放线菌CDF芽胞萌发的影响 | 第98-100页 |
| ·蛋白酶CDF在枯草芽胞杆菌中的表达及影响 | 第100-103页 |
| ·高温放线菌CDF及其芽胞和蛋白酶CDF对人体细胞影响的初步研究 | 第103-108页 |
| ·讨论 | 第108-113页 |
| ·蛋白酶CDF的酶性质 | 第108-109页 |
| ·蛋白酶CDF的成熟 | 第109-111页 |
| ·蛋白酶CDF的定位与功能 | 第111-113页 |
| ·本章小结 | 第113-114页 |
| 第四章 高温放线菌CDF胞外蛋白酶C2的性质研究 | 第114-128页 |
| ·高温放线菌CDF胞外蛋白酶的分离纯化及N端序列的测定 | 第114-115页 |
| ·胞外蛋白酶C2基因的克隆和表达 | 第115-120页 |
| ·蛋白酶C2基因的克隆 | 第115-117页 |
| ·蛋白酶C2在大肠杆菌中的表达和纯化 | 第117-119页 |
| ·蛋白酶C2在枯草芽胞杆菌中的表达 | 第119-120页 |
| ·重组蛋白酶C2的生化活性分析 | 第120-124页 |
| ·蛋白酶C2的底物特异性 | 第120-122页 |
| ·温度对蛋白酶C2活性的影响 | 第122-123页 |
| ·化学试剂和商用洗涤剂对蛋白酶C2活性的影响 | 第123-124页 |
| ·重组蛋白酶C2对羽毛的降解能力分析 | 第124-125页 |
| ·讨论 | 第125-127页 |
| ·蛋白酶C2的重组表达 | 第125-126页 |
| ·蛋白酶C2的酶性质 | 第126-127页 |
| ·本章小结 | 第127-128页 |
| 总结和展望 | 第128-130页 |
| 参考文献 | 第130-139页 |
| 攻博期间发表的论文 | 第139-140页 |
| 致谢 | 第140页 |
