| 中文摘要 | 第1-12页 |
| ABSTRACT | 第12-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-26页 |
| ·Chromodomain蛋白家族及进化 | 第14-16页 |
| ·Chromodomain的结构 | 第16-17页 |
| ·Chromodomain蛋白的功能 | 第17-19页 |
| ·Chromodomain蛋白具有染色质结合能力 | 第17页 |
| ·Chromodomain蛋白具有多种酶活性 | 第17-18页 |
| ·Chromodomain蛋白参与了转录沉默 | 第18-19页 |
| ·Chromodomain蛋白参与了核糖核蛋白复合体的组装 | 第19页 |
| ·模式生物嗜热四膜虫 | 第19-20页 |
| ·本课题的研究意义 | 第20-22页 |
| 参考文献 | 第22-26页 |
| 第二章 嗜热四膜虫中TCD3和TCD4基因的生物信息学分析 | 第26-32页 |
| ·材料 | 第26-27页 |
| ·菌株 | 第26页 |
| ·主要试剂 | 第26-27页 |
| ·主要试剂配制 | 第27页 |
| ·主要仪器设备 | 第27页 |
| ·方法 | 第27-29页 |
| ·嗜热四膜虫的培养和饥饿 | 第27页 |
| ·嗜热四膜的交配 | 第27-28页 |
| ·嗜热四膜虫RNA的提取 | 第28页 |
| ·嗜热四膜虫RNA的反转录 | 第28页 |
| ·嗜热四膜虫基因TCD3和TCD4的实时荧光定量分析 | 第28-29页 |
| ·结果 | 第29-30页 |
| ·TCD3和TCD4基因的序列分析 | 第29-30页 |
| ·TCD3和TCD4基因的表达谱分析 | 第30页 |
| ·讨论 | 第30-31页 |
| 参考文献 | 第31-32页 |
| 第三章 嗜热四膜虫小核TCD3和TCD4基因的敲除及其功能研究 | 第32-46页 |
| ·材料 | 第32-34页 |
| ·菌株和质粒 | 第32页 |
| ·主要试剂盒工具酶 | 第32-33页 |
| ·主要试剂的配制 | 第33-34页 |
| ·主要仪器设备 | 第34页 |
| ·方法 | 第34-40页 |
| ·嗜热四膜虫的培养、饥饿、配对 | 第34页 |
| ·TCD3和TCD4的上游和下游侧翼序列的克隆及中间载体的构建 | 第34-37页 |
| ·TCD3和TCD4敲除载体的构建 | 第37-38页 |
| ·重组质粒的线性化 | 第38页 |
| ·四膜虫细胞的转化 | 第38-39页 |
| ·TCD3-TCD4敲除株的筛选与遗传学分析 | 第39-40页 |
| ·DAPI染核观察TCD3和TCD4小核敲除株有性生殖时期的核发育 | 第40页 |
| ·嗜热四膜虫敲除株ΔTCD3-4-Ⅰ和ΔTCD3-4-Ⅱ的RNA提取 | 第40页 |
| ·嗜热四膜虫RNA的反转录 | 第40页 |
| ·嗜热四膜虫敲除株ΔTCD3-4-Ⅰ和ΔTCD3-4-Ⅱ的RT-PCR分析 | 第40页 |
| ·结果 | 第40-43页 |
| ·TCD3和TCD4的敲除载体pNEO4-TCD3-4的鉴定 | 第41页 |
| ·TCD3和TCD4小核敲除株细胞的鉴定 | 第41-42页 |
| ·TCD3和TCD4是嗜热四膜虫有性生殖所必需的 | 第42-43页 |
| ·讨论 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-46页 |
| 第四章 嗜热四膜虫HA-Tcd3p和HA-Tcd4p的定位分析 | 第46-57页 |
| ·材料 | 第46-48页 |
| ·菌株和质粒 | 第46页 |
| ·试剂与工具酶 | 第46-47页 |
| ·主要试剂的配制 | 第47-48页 |
| ·方法 | 第48-54页 |
| ·四膜虫的培养、饥饿和配对 | 第48页 |
| ·嗜热四膜虫pBX-HA-TCD3和pBX-HA-TCD4表达载体的构建 | 第48-51页 |
| ·嗜热四膜虫的转化 | 第51页 |
| ·四膜虫转化菌株的筛选 | 第51-52页 |
| ·Laudowsky's固定法间接免疫荧光定位分析 | 第52-54页 |
| ·结果 | 第54-55页 |
| ·pBX-HA-TCD3和pBX-HA-TCD4表达载体及转化菌株的鉴定 | 第54页 |
| ·HA-Tcd3p和HA-Tcd4p在嗜热四膜虫有性生殖时期的免疫荧光定位分析 | 第54-55页 |
| ·讨论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-57页 |
| 第五章 嗜热四膜虫Tcd3p和Tcd4p的结构域功能分析 | 第57-71页 |
| ·材料 | 第57-59页 |
| ·菌株和质粒 | 第57页 |
| ·试剂与工具酶 | 第57-58页 |
| ·主要试剂的配制 | 第58-59页 |
| ·方法 | 第59-64页 |
| ·四膜虫的培养、饥饿和配对 | 第59页 |
| ·嗜热四膜虫pBX-HA-3CD-TCD4和pBX-HA-4CD-TCD3表达载体的构建 | 第59-64页 |
| ·嗜热四膜虫pBX-HA-Tcd3p~(del 1-68)表达载体的构建 | 第64页 |
| ·嗜热四膜虫pBX-HA-Tcd4p~(del 1-55)和pBX-HA- Tcd4p~(del 56-344)表达载体的构建 | 第64页 |
| ·嗜热四膜虫的转化 | 第64页 |
| ·四膜虫转化菌株的筛选 | 第64页 |
| ·利用RNase A处理四膜虫 | 第64页 |
| ·嗜热四膜虫RNA的提取 | 第64页 |
| ·Laudowsky's固定法间接免疫荧光定位分析 | 第64页 |
| ·结果 | 第64-69页 |
| ·嗜热四膜虫pBX-HA-3CD-TCD4和pBX-HA-4CD-TCD3表达载体及转化菌株的鉴定 | 第64-65页 |
| ·Chromodomain是Tcd4p定位在conjusome上所必需的 | 第65-66页 |
| ·嗜热四膜虫pBX-HA-Tcd3p~(del 1-68)、pBX-HA-Tcd4p~(del 1-55)和pBX-HA-Tcd4p~(del 56-344)表达载体及转化菌株的鉴定 | 第66页 |
| ·Chromodomain不是蛋白Tcd3p和Tcd4p在大核上定位所必需的 | 第66-67页 |
| ·Tcd4p通过chromodomain与RNA相互作用定位在conjusome上 | 第67-69页 |
| ·讨论 | 第69页 |
| 参考文献 | 第69-71页 |
| 总结与展望 | 第71-73页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 个人简况及联系方式 | 第75-77页 |
