| 摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-15页 |
| 第一章 前言 | 第15-35页 |
| 1 褐飞虱的研究概况 | 第15-16页 |
| 2 精氨酸激酶基因的研究 | 第16-23页 |
| ·磷酸原激酶概述 | 第16-18页 |
| ·精氨酸激酶的蛋白质结构 | 第18-20页 |
| ·精氨酸激酶的基因拷贝数及表达情况 | 第20-22页 |
| ·精氨酸激酶的进化过程 | 第22-23页 |
| ·精氨酸激酶与抗性的关系 | 第23页 |
| 3 实时荧光定量PCR内参基因的筛选 | 第23-26页 |
| ·绝对定量分析和相对定量分析 | 第23-24页 |
| ·筛选内参基因 | 第24-25页 |
| ·数据分析方法 | 第25-26页 |
| 4 昆虫的RNAi研究进展 | 第26-34页 |
| ·RNAi的作用机制 | 第26-29页 |
| ·介导双链RNA进入昆虫体内的方法 | 第29-32页 |
| ·微量注射法 | 第29-30页 |
| ·浸泡法 | 第30页 |
| ·组织培养法 | 第30-31页 |
| ·人工饲料饲喂法 | 第31页 |
| ·转基因植物介导法 | 第31-32页 |
| ·昆虫RNAi效率的影响因素 | 第32-33页 |
| ·导入方式 | 第32页 |
| ·dsRNA浓度 | 第32页 |
| ·dsRNA的设计 | 第32-33页 |
| ·昆虫RNAi的可遗传性 | 第33页 |
| ·亲本RNAi(partenal RANi) | 第33页 |
| ·可遗传RNAi(heritable RNAi) | 第33页 |
| ·RNAi在害虫防治中的应用 | 第33-34页 |
| 5 本研究的目的和意义 | 第34-35页 |
| 第二章 材料与方法 | 第35-64页 |
| 1 实验材料 | 第35-37页 |
| ·供试昆虫 | 第35页 |
| ·供试水稻 | 第35页 |
| ·菌株和载体 | 第35页 |
| ·主要仪器设备及耗材 | 第35-37页 |
| ·实验试剂 | 第37页 |
| 2 研究方法 | 第37-64页 |
| ·常用试剂及培养基的配制 | 第37-38页 |
| ·褐飞虱人工饲料的配制及褐飞虱的人工饲喂方法 | 第38-39页 |
| ·水稻营养液的配制 | 第39-40页 |
| ·内参基因引物设计及初步筛选 | 第40-41页 |
| ·不同试验条件下的试虫及其cDNA模板的挑选 | 第41-44页 |
| ·不同发育时期 | 第41页 |
| ·不同组织部位 | 第41页 |
| ·不同地理种群 | 第41-42页 |
| ·不同温度处理 | 第42页 |
| ·不同杀虫剂处理 | 第42页 |
| ·不同饲料处理 | 第42-43页 |
| ·饥饿处理 | 第43页 |
| ·总RNA的提取和cDNA第一链合成 | 第43-44页 |
| ·内参基因稳定性的分析方法 | 第44-46页 |
| ·qRT-PCR方法 | 第44-45页 |
| ·数据处理和分析方法 | 第45-46页 |
| ·精氨酸激酶在褐飞虱体内的表达分析 | 第46-48页 |
| ·精氨酸激酶基因表达谱 | 第46页 |
| ·精氨酸激酶酶活性测定 | 第46-48页 |
| ·褐飞虱精氨酸激酶基因的克隆、5'-RACE和3'-RACE | 第48-54页 |
| ·引物设计 | 第48页 |
| ·Trizol抽提褐飞虱总RNA | 第48-49页 |
| ·纯化褐飞虱mRNA | 第49-50页 |
| ·制备褐飞虱Marathon cDNA | 第50-51页 |
| ·nlak基因的克隆 | 第51-52页 |
| ·nlak基因的5'-RACE和3'-RACE | 第52-54页 |
| ·昆虫杆状病毒系统表达褐飞虱重组精氨酸激酶 | 第54-59页 |
| ·sf21细胞传代 | 第54页 |
| ·构建重组pBavAK8-nlak质粒 | 第54-55页 |
| ·重组Ac NPV-N1AK在昆虫杆状病毒中表达 | 第55-56页 |
| ·SDS-PAGE | 第56-58页 |
| ·Western-Blotting | 第58-59页 |
| ·制备dsRNA | 第59-62页 |
| ·引物设计 | 第59-60页 |
| ·制备模板 | 第60-61页 |
| ·dsRNA的合成、纯化及检测 | 第61-62页 |
| ·dsRNA的饲喂 | 第62页 |
| ·dsRNA在人工饲料中的稳定性 | 第62页 |
| ·dsRNA使用浓度的确定 | 第62页 |
| ·dsRNA转入褐飞虱体内 | 第62页 |
| ·RNAi分析 | 第62-63页 |
| ·数据处理 | 第63-64页 |
| 第三章 结果与分析 | 第64-99页 |
| 1 褐飞虱实时荧光定量PCR中内参基因的选择 | 第64-81页 |
| ·各候选内参基因的表达水平 | 第64页 |
| ·不同发育时期各内参基因表达稳定性分析 | 第64-67页 |
| ·不同组织部位各内参基因表达稳定性分析 | 第67-69页 |
| ·不同地理种群各内参基因表达稳定性分析 | 第69-71页 |
| ·不同温度处理下各内参基因表达稳定性分析 | 第71-72页 |
| ·不同药剂下各内参基因表达稳定性分析 | 第72-75页 |
| ·不同食物饲喂时各内参基因表达稳定性分析 | 第75-79页 |
| ·饥饿处理时各内参基因表达稳定性分析 | 第79-80页 |
| ·所有样品内参基因表达稳定性分析 | 第80-81页 |
| 2 褐飞虱精氨酸激酶基因的克隆及其分子特性研究 | 第81-99页 |
| ·nlak基因克隆与分析 | 第81-85页 |
| ·昆虫杆状病毒表达系统表达褐飞虱精氨酸激酶重组蛋白 | 第85-88页 |
| ·重组pBavAK8-nlak质粒的构建 | 第85-86页 |
| ·重组Ac NPV-N1AK在昆虫杆状病毒系统中的表达 | 第86-88页 |
| ·nlak基因表达谱分析 | 第88-94页 |
| ·不同发育时期nlak基因的表达分析 | 第88-89页 |
| ·不同组织部位nlak基因的表达分析 | 第89页 |
| ·不同地理种群nlak基因的表达分析 | 第89-90页 |
| ·不同温度处理下nlak基因的表达分析 | 第90-91页 |
| ·不同药剂处理下nlak基因的表达分析 | 第91页 |
| ·不同食物处理下nlak基因的表达分析 | 第91-92页 |
| ·饥饿处理下nlak基因的表达分析 | 第92-93页 |
| ·不同发育时期褐飞虱精氨酸激酶的酶活性测定 | 第93页 |
| ·不同组织部位褐飞虱精氨酸激酶的酶活性测定 | 第93-94页 |
| ·nlak基因RNAi的分析 | 第94-99页 |
| ·dsRNA在人工饲料中的稳定性分析 | 第94-95页 |
| ·dsRNA使用浓度的确定 | 第95-96页 |
| ·nlak基因RNAi后对存活率的影响 | 第96页 |
| ·nlak基因RNAi后褐飞虱nlak基因表达量的变化 | 第96-97页 |
| ·nlak基因RNAi后酶活性测定 | 第97-99页 |
| 第四章 总结与讨论 | 第99-109页 |
| 1 全文总结 | 第99-100页 |
| 2 讨论 | 第100-109页 |
| ·褐飞虱内参基因筛选的研究 | 第100-104页 |
| ·褐飞虱nlak基因RNAi的研究 | 第104-109页 |
| 第五章 创新点 | 第109-110页 |
| 参考文献 | 第110-127页 |
| 附录 攻读博士学位期间发表文章 | 第127-128页 |
| 致谢 | 第128页 |
