| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-10页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 第一章 引言 | 第11-25页 |
| ·副猪嗜血杆菌研究概述 | 第11-14页 |
| ·副猪嗜血杆菌病原学 | 第11页 |
| ·副猪嗜血杆菌血清型 | 第11-12页 |
| ·副猪嗜血杆菌分子分型 | 第12页 |
| ·副猪嗜血杆菌感染发病机制 | 第12-13页 |
| ·流行病学 | 第13页 |
| ·副猪嗜血杆菌感染临床症状 | 第13页 |
| ·疾病治疗和预防 | 第13-14页 |
| ·副猪嗜血杆菌毒力因子研究进展 | 第14-19页 |
| ·血清型和菌株毒力 | 第14-15页 |
| ·巴斯德科菌成员毒力因子 | 第15-16页 |
| ·利用生物学策略及模拟不同生长条件鉴定HPS毒力因子 | 第16-17页 |
| ·血清敏感性与副猪嗜血杆菌基因缺失菌株研究 | 第17-18页 |
| ·副猪嗜血杆菌疫苗研究进展 | 第18页 |
| ·DNA新型疫苗研究 | 第18-19页 |
| ·细菌耐热冻干保护剂研究进展 | 第19-25页 |
| ·冷冻干燥制备高活菌数菌粉应考虑的因素 | 第19-20页 |
| ·保护剂 | 第20-21页 |
| ·保护剂作用机理 | 第21-22页 |
| ·保护剂在细菌中的研究应用 | 第22页 |
| ·冻干曲线的设定 | 第22-25页 |
| 第二章 副猪嗜血杆菌耐热冻干保护剂研制 | 第25-57页 |
| ·试验材料 | 第25-26页 |
| ·副猪嗜血杆菌菌株 | 第25页 |
| ·主要试剂及配置 | 第25页 |
| ·主要仪器设备 | 第25-26页 |
| ·方法 | 第26-34页 |
| ·副猪嗜血杆菌15种血清型标准菌株工作种子批建立 | 第26-27页 |
| ·副猪嗜血杆菌冻干品工艺流程 | 第27-29页 |
| ·保护剂基础配方筛选 | 第29页 |
| ·保护剂基础配方组分分析调整 | 第29-30页 |
| ·保护剂基质对冻干存活率的影响 | 第30-33页 |
| ·Plackett-Burman实验确定影响菌体存活率的显著因子 | 第33-34页 |
| ·Box- Behnken响应面实验确定因素的最优水平 | 第34页 |
| ·结果 | 第34-53页 |
| ·HPS15种血清型标准菌株工作种子批建立 | 第34-37页 |
| ·副猪嗜血杆菌培养基筛选及生长曲线测定结果 | 第37-38页 |
| ·共晶点测定及冻干曲线设计结果 | 第38-39页 |
| ·保护剂基础配方筛选结果 | 第39-41页 |
| ·单组分缺失实验保护剂组分作用分析及比例调整结果 | 第41-46页 |
| ·保护剂优化研究结果 | 第46-47页 |
| ·Plackett-Burman实验确定影响试验的显著因子 | 第47-49页 |
| ·Box- Behnken响应面实验确定因素的最优水平 | 第49-53页 |
| ·讨论 | 第53-56页 |
| ·副猪嗜血杆菌鉴定 | 第53-54页 |
| ·冻干实验样品外观异常现象处理 | 第54页 |
| ·影响副猪嗜血杆菌菌体存活率因素分析 | 第54-56页 |
| ·结论 | 第56-57页 |
| ·副猪嗜血杆菌鉴定培养 | 第56页 |
| ·保护剂研制 | 第56页 |
| ·保护剂优化 | 第56-57页 |
| 第三章 副猪嗜血杆菌外膜蛋白OmpA蛋白克隆表达 | 第57-71页 |
| ·材料 | 第57-58页 |
| ·副猪嗜血杆菌菌株 | 第57页 |
| ·所用试剂 | 第57页 |
| ·主要仪器设备 | 第57-58页 |
| ·方法 | 第58-63页 |
| ·HPS外膜蛋白ompA-pET32a大肠杆菌BL21原核表达体系构建 | 第58-60页 |
| ·副猪嗜血杆菌外膜蛋白ompA表达形式的确定 | 第60页 |
| ·优化蛋白表达温度 | 第60页 |
| ·优化IPTG诱导表达添加量 | 第60页 |
| ·副猪嗜血杆菌外膜蛋白ompA可溶性表达 | 第60-61页 |
| ·高纯度包涵体获得及纯化 | 第61-62页 |
| ·Western-Blot检测蛋白反应原性 | 第62页 |
| ·豚鼠免疫试验 | 第62-63页 |
| ·攻毒试验 | 第63页 |
| ·结果 | 第63-69页 |
| ·HPS外膜蛋白ompA原核表达载体构建 | 第63-65页 |
| ·副猪嗜血杆菌外膜蛋白ompA表达形式 | 第65-66页 |
| ·最优蛋白表达温度 | 第66页 |
| ·最优IPTG诱导表达添加量 | 第66-67页 |
| ·低温条件下蛋白可溶性表达 | 第67-68页 |
| ·HPS外膜蛋白ompA反应原性 | 第68页 |
| ·副猪嗜血杆菌对清洁级豚鼠的致病性试验结果 | 第68页 |
| ·豚鼠免疫攻毒保护试验 | 第68-69页 |
| ·讨论 | 第69-70页 |
| ·外膜蛋白ompA免疫原性 | 第69页 |
| ·重组蛋白表达及其反应原性 | 第69-70页 |
| ·重组蛋白的变性复性 | 第70页 |
| ·重组蛋白的免疫原性 | 第70页 |
| ·结论 | 第70-71页 |
| 第四章 结论 | 第71-72页 |
| 第五章 下一步工作的方向 | 第72-73页 |
| ·副猪嗜血杆菌耐热冻干保护剂弱毒疫苗研制研制 | 第72页 |
| ·HPS外膜蛋白ompA应用 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 附录 | 第80-84页 |
| 作者简历 | 第84页 |
