| 摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-15页 |
| 前言 | 第15-17页 |
| 第一部分 组氨酸蛋白激酶 DRK1 基因全长的序列测定 | 第17-26页 |
| 材料与方法 | 第17-20页 |
| 1. 材料 | 第17页 |
| 2. 方法 | 第17-20页 |
| 实验结果 | 第20-25页 |
| 1. DRK1 保守区域的扩增 | 第20-21页 |
| 2. 两个保守区域间区的序列扩增 | 第21页 |
| 3. 3’RACE 的 PCR 扩增 | 第21页 |
| 4. 5’RACE 的 PCR 扩增 | 第21页 |
| 5. DRK1 全长拼接序列 | 第21页 |
| 6. DRK1 氨基酸序列推导 | 第21-22页 |
| 7. 组氨酸蛋白激酶 DRK1 结构域的鉴定 | 第22页 |
| 8. 孢子丝菌 DRK1 与其他真菌组氨酸激酶氨基酸序列的比对 | 第22-24页 |
| 9. 实时定量 PCR 检测 DRK1 在菌丝相与酵母相中的表达水平 | 第24-25页 |
| 讨论 | 第25-26页 |
| 第二部分 组氨酸激酶 DRK1 基因 RNA 干扰菌株的构建 | 第26-47页 |
| 材料与方法 | 第27-42页 |
| 1. 材料 | 第27-29页 |
| ·菌株 | 第27页 |
| ·质粒 | 第27页 |
| ·酶和主要试剂 | 第27-28页 |
| ·培养基 | 第28页 |
| ·实验所用引物 | 第28-29页 |
| 2. 方法 | 第29-42页 |
| ·质粒提取 | 第29页 |
| ·DNA 纯化回收 | 第29页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第29页 |
| ·转化感受态细胞 | 第29-30页 |
| ·pCB309 的构建 | 第30-35页 |
| ·RNA 干扰载体 pCB309-PDUDT 及干扰菌株的构建 | 第35-42页 |
| 实验结果 | 第42-47页 |
| 1、 干扰载体构建过程中涉及到的酶切及 PCR 鉴定图 | 第42-43页 |
| 2、 PCB301 全序列及 PCB309-PDUDT 的测序验证 | 第43-45页 |
| 3、 确定申克孢子丝菌对潮霉素的敏感性 | 第45页 |
| 4、 应用 Real Time PCR 方法进行申克孢子丝菌组氨酸激酶DRK1 基因相对表达量分析 | 第45-47页 |
| 讨论 | 第47页 |
| 第三部分 组氨酸激酶 DRK1 基因功能的研究 | 第47-61页 |
| 材料与方法 | 第48-51页 |
| 1. 材料 | 第48-49页 |
| 2. 方法 | 第49-51页 |
| 实验结果 | 第51-60页 |
| 1. 组氨酸激酶基因沉默后孢子丝菌的表型变化 | 第51-54页 |
| 2. DRK1 基因干扰对孢子丝菌菌丝相酵母相转化的影响 | 第54页 |
| 3. DRK1 基因对孢子丝菌超微结构的影响 | 第54-56页 |
| 4. DRK1-i 对细胞壁组分合成的影响 | 第56-57页 |
| 5. DRK1 对下游调控基因的影响 | 第57-59页 |
| 6. 动物实验结果 | 第59-60页 |
| 讨论 | 第60-61页 |
| 第四部分 黄芪抗小鼠孢子丝菌感染机制的初探 | 第61-65页 |
| 材料与方法 | 第62-63页 |
| 1. 材料 | 第62页 |
| 2. 方法 | 第62-63页 |
| 实验结果 | 第63-64页 |
| 讨论 | 第64-65页 |
| 结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-69页 |
| 综述 | 第69-77页 |
| 参考文献 | 第74-77页 |
| 附录 | 第77-85页 |
| 缩略语表 | 第85-86页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第86-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
