| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-11页 |
| 英文缩写表 | 第11-23页 |
| 第1章 绪论 | 第23-39页 |
| ·课题背景 | 第23-35页 |
| ·HIV 基因治疗 | 第24-29页 |
| ·慢病毒载体 | 第29-31页 |
| ·细胞微粒子（生物纳米颗粒） | 第31-32页 |
| ·人脐带间充质干细胞 | 第32-34页 |
| ·端粒酶催化亚基与细胞永生化 | 第34-35页 |
| ·课题项目来源 | 第35页 |
| ·本文主要研究内容及意义 | 第35-39页 |
| 第2章 慢病毒介导 siRNA 对 HIV 抑制作用研究 | 第39-61页 |
| ·实验材料 | 第39-41页 |
| ·菌株、质粒、细胞株和病毒株 | 第39-40页 |
| ·试剂和酶 | 第40页 |
| ·主要仪器 | 第40-41页 |
| ·实验方法 | 第41-50页 |
| ·基础实验方法 | 第41-42页 |
| ·表达单个 shRNA 重组慢病毒质粒的构建 | 第42-43页 |
| ·对靶向基因的干扰效果测定 | 第43-45页 |
| ·重组慢病毒表达质粒对病毒包装的抑制效果 | 第45-47页 |
| ·重组慢病毒包装、滴度测定和感染能力检测 | 第47页 |
| ·重组慢病毒感染 MT4 细胞及细胞系筛选 | 第47-48页 |
| ·在 MT4 细胞水平 HIV-1 攻毒实验 | 第48-49页 |
| ·CD34+人造血干细胞分离与培养 | 第49-50页 |
| ·重组慢病毒感染 CD34+ HSCs | 第50页 |
| ·实验结果 | 第50-58页 |
| ·重组慢病毒表达质粒构建 | 第50-51页 |
| ·重组慢病毒表达质粒对靶向基因的抑制效果 | 第51-53页 |
| ·重组慢病毒表达质粒对病毒包装的抑制效果 | 第53-54页 |
| ·重组慢病毒包装、滴度测定和感染能力检测结果 | 第54-55页 |
| ·重组慢病毒感染 MT-4 细胞及细胞系筛选 | 第55-56页 |
| ·HIV-1 攻毒实验结果 | 第56-57页 |
| ·CD34+ hHSC 细胞的分离与培养 | 第57页 |
| ·重组慢病毒感染 CD34+ HSCs | 第57-58页 |
| ·讨论 | 第58-59页 |
| ·小结 | 第59-61页 |
| 第3章 慢病毒介导双 siRNA 对 HIV 抑制作用的研究 | 第61-75页 |
| ·实验材料 | 第61-62页 |
| ·菌株、质粒、细胞株和病毒株 | 第61-62页 |
| ·试剂和酶 | 第62页 |
| ·主要仪器 | 第62页 |
| ·实验方法 | 第62-67页 |
| ·双 shRNA 重组慢病毒穿梭质粒的构建 | 第62-63页 |
| ·双 shRNA 重组慢病毒表达质粒对靶向基因的抑制效果 | 第63-65页 |
| ·双 shRNA 重组表达质粒对病毒包装产量的抑制效果 | 第65页 |
| ·重组慢病毒包装、滴度测定和感染能力检测 | 第65-66页 |
| ·重组慢病毒感染 MT4 细胞及细胞系筛选 | 第66页 |
| ·在 MT4 细胞水平 HIV-1 攻毒实验 | 第66-67页 |
| ·实验结果 | 第67-71页 |
| ·双 shRNA 重组慢病毒穿梭质粒的构建 | 第67-68页 |
| ·双 shRNA 重组慢病毒表达质粒对靶向基因的抑制效果 | 第68-69页 |
| ·双 shRNA 慢病毒表达质粒对病毒包装产量的抑制效果 | 第69-70页 |
| ·双 shRNA 重组慢病毒包装、滴度测定和感染能力检测 | 第70页 |
| ·重组慢病毒感染 MT4 细胞及细胞系筛选 | 第70-71页 |
| ·HIV-1 NL4-3 攻毒实验 | 第71页 |
| ·讨论 | 第71-72页 |
| ·小结 | 第72-75页 |
| 第4章 慢病毒介导 Trim5a 突变体和 siRNA 对 HIV 的联合抑制作用 | 第75-91页 |
| ·实验材料 | 第75-76页 |
| ·菌株、质粒、细胞株和病毒株 | 第75-76页 |
| ·试剂和酶 | 第76页 |
| ·主要仪器 | 第76页 |
| ·实验方法 | 第76-82页 |
| ·plvx-puro 表达质粒的改造 | 第76-77页 |
| ·重组慢病毒表达质粒构建 | 第77-79页 |
| ·Trim5a(R332P)在 293T 细胞中表达检测 | 第79页 |
| ·重组慢病毒表达质粒对靶向基因的抑制效果 | 第79-80页 |
| ·重组慢病毒表达质粒对病毒包装产量的抑制效果 | 第80页 |
| ·重组慢病毒包装、滴度测定和感染能力检测 | 第80-81页 |
| ·Trim5a(R332P)抗 HIV-1 功能研究 | 第81页 |
| ·重组慢病毒感染 MT4 细胞及细胞系筛选 | 第81-82页 |
| ·在 MT4 细胞水平 HIV-1 攻毒实验 | 第82页 |
| ·实验结果 | 第82-88页 |
| ·plvx-puro 穿梭质粒的改造 | 第82-83页 |
| ·重组慢病毒表达质粒构建结果 | 第83-84页 |
| ·Western blot 检测 TRIM5a(R332P)蛋白表达 | 第84页 |
| ·重组慢病毒穿梭质粒对靶向基因的抑制效果 | 第84-85页 |
| ·重组慢病毒表达质粒对病毒包装的抑制效果 | 第85-86页 |
| ·重组慢病毒包装、滴度测定和感染能力检测 | 第86页 |
| ·Trim5a(R332P)抗 HIV 功能检测结果 | 第86-87页 |
| ·重组慢病毒感染 MT4 细胞及细胞系筛选 | 第87页 |
| ·HIV-1 NL4-3 攻毒实验 | 第87-88页 |
| ·讨论 | 第88-90页 |
| ·小结 | 第90-91页 |
| 第5章 永生化人脐带间充质干细胞的建立、鉴定及应用 | 第91-115页 |
| ·实验材料 | 第91-92页 |
| ·菌株、质粒、细胞株 | 第91-92页 |
| ·试剂和酶 | 第92页 |
| ·主要仪器 | 第92页 |
| ·实验动物 | 第92页 |
| ·实验方法 | 第92-100页 |
| ·脐带间充质干细胞的原代培养、传代及冻存和复苏 | 第92-93页 |
| ·重组慢病毒载体的构建 | 第93-94页 |
| ·hTERT 在真核细胞水平上的表达 | 第94-95页 |
| ·重组慢病毒包装和病毒滴度测定 | 第95页 |
| ·重组慢病毒感染人脐带间充质干细胞及稳定细胞系筛选 | 第95页 |
| ·基因组 DNA 水平上检测 htert | 第95-96页 |
| ·mRNA 水平上检测 htert 表达 | 第96-97页 |
| ·端粒酶活性检测 | 第97-98页 |
| ·细胞表面抗原检测 | 第98页 |
| ·诱导成骨细胞实验 | 第98-99页 |
| ·核型分型 | 第99页 |
| ·SCID 小鼠体内实验 | 第99-100页 |
| ·HIV 广谱中和抗体 2G12 在 huMSCs-htert 的表达 | 第100页 |
| ·实验结果 | 第100-110页 |
| ·人脐带间充质干细胞培养 | 第100-101页 |
| ·重组慢病毒表达质粒构建结果 | 第101-103页 |
| ·重组慢病毒表达质粒在真核细胞内的表达 | 第103-104页 |
| ·重组慢病毒包装和滴度测定 | 第104-105页 |
| ·重组慢病毒感染人脐带间充质干细胞及稳定细胞系的筛选 | 第105-106页 |
| ·基因组 DNA 水平检测 htert | 第106页 |
| ·mRNA 水平检测 htert 表达情况 | 第106页 |
| ·端粒酶活性检测结果 | 第106-107页 |
| ·细胞表面抗原检测 | 第107-108页 |
| ·核型分析 | 第108页 |
| ·诱导成骨检测结果 | 第108-109页 |
| ·SCID 小鼠致瘤实验结果 | 第109-110页 |
| ·2G12 在 hucMSCs-htert 中表达结果 | 第110页 |
| ·讨论 | 第110-112页 |
| ·小结 | 第112-115页 |
| 第6章 生物纳米微粒介导 siRNA 靶向于 HIV 的抑制作用研究 | 第115-123页 |
| ·实验材料 | 第115-116页 |
| ·菌株、质粒、细胞株 | 第115-116页 |
| ·试剂和酶 | 第116页 |
| ·主要仪器 | 第116页 |
| ·实验方法 | 第116-117页 |
| ·细胞培养 | 第116页 |
| ·表达 shRNA 的重组慢病毒载体的构建和包装 | 第116页 |
| ·重组慢病毒感染 hucMSCs-htert 细胞系及阳性细胞筛选 | 第116页 |
| ·含有靶向于 HIV 特异的 siRNA 生物纳米微粒的制备 | 第116-117页 |
| ·含有靶向于 HIV siRNA 生物纳米微粒靶向基因的干扰效果 | 第117页 |
| ·实验结果 | 第117-119页 |
| ·表达 shRNA 的 hucMSCs-htert 稳定细胞系的建立 | 第117-118页 |
| ·纳米微粒子的制备和检测 | 第118页 |
| ·包裹 siRNA 的生物纳米微粒对靶向基因的抑制作用 | 第118-119页 |
| ·讨论 | 第119-120页 |
| ·小结 | 第120-123页 |
| 结论 | 第123-125页 |
| 参考文献 | 第125-133页 |
| 附录 | 第133-139页 |
| 攻读博士学位期间的主要成果 | 第139-141页 |
| 致谢 | 第141页 |
