| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-6页 |
| 引言 | 第6-11页 |
| 第一部分 文献综述 | 第11-28页 |
| 第一章 增殖诱导配体(APRIL)的研究进展 | 第12-18页 |
| ·APRIL的发现及结构特点 | 第12-13页 |
| ·APRIL的受体及结构特征 | 第13页 |
| ·APRIL及其受体的组织细胞分布 | 第13-14页 |
| ·APRIL及其受体的信号转导途径 | 第14页 |
| ·APRIL的生物学功能 | 第14-17页 |
| ·对B细胞的作用 | 第15-16页 |
| ·对T细胞的作用 | 第16页 |
| ·对其他细胞的作用 | 第16页 |
| ·在自身免疫性疾病及恶性肿瘤中的作用 | 第16-17页 |
| ·展望 | 第17-18页 |
| 第二章 LIGHT及其受体HVEM的研究进展 | 第18-24页 |
| ·LIGHT结构特点及表达分布 | 第18-19页 |
| ·LIGHT受体的结构特点及表达分布 | 第19页 |
| ·LIGHT及其受体的生物学作用 | 第19-22页 |
| ·对T淋巴细胞的共刺激作用 | 第20页 |
| ·加强DC细胞介导的T细胞免疫 | 第20页 |
| ·HVEM依赖的HSV1感染的阻断作用 | 第20-21页 |
| ·对GVHD的影响 | 第21页 |
| ·抗肿瘤效应与自身免疫疾病 | 第21-22页 |
| ·LIGHT与受体介导的信号通路 | 第22-23页 |
| ·展望 | 第23-24页 |
| 第三章 研究物种简介 | 第24-28页 |
| ·非洲爪蟾简介 | 第24页 |
| ·非洲爪蟾的分类及形态特征 | 第24页 |
| ·非洲爪蟾的研究用途 | 第24页 |
| ·非洲爪蟾的研究进展 | 第24-26页 |
| ·在疾病动物模型中的研究及应用 | 第24-25页 |
| ·在药物筛选方面的研究及应用 | 第25页 |
| ·在发育生物学、基因功能研究、疾病治疗等领域的应用 | 第25页 |
| ·非洲爪蟾APRIL基因研究进展 | 第25-26页 |
| ·犬简介 | 第26-28页 |
| ·犬分类及特征 | 第26页 |
| ·犬的研究进展 | 第26-27页 |
| ·犬LIGHT及其受体HVEM的研究进展 | 第27-28页 |
| 第二部分 实验部分 | 第28-64页 |
| 第四章 非洲爪蟾增殖诱导配体(APRIL)的克隆、表达及生物学功能研究 | 第29-48页 |
| ·实验材料 | 第29-30页 |
| ·实验动物、质粒、菌种 | 第29页 |
| ·试剂和耗材 | 第29页 |
| ·主要实验仪器 | 第29-30页 |
| ·实验方法 | 第30-40页 |
| ·非洲爪蟾APRIL基因的克隆 | 第30-34页 |
| ·脾脏细胞总RNA的提取 | 第30页 |
| ·RT-PCR扩增X1APRIL中间片段 | 第30-31页 |
| ·3'-RACE-Ready cDNA或5'-RACE-Ready cDNA合成 | 第31页 |
| ·引物的设计 | 第31-32页 |
| ·扩增X1APRIL基因的3’端和5’端 | 第32-34页 |
| ·序列拼接及鉴定 | 第34页 |
| ·生物信息学分析 | 第34页 |
| ·real-time PCR检测APRIL的组织分布 | 第34-35页 |
| ·各组织总RNA的提取 | 第34页 |
| ·引物的设计 | 第34-35页 |
| ·Real-time PCR | 第35页 |
| ·数据分析 | 第35页 |
| ·重组表达载体pSUMO-XsAPRIL的构建 | 第35-37页 |
| ·引物设计 | 第35页 |
| ·PCR反应 | 第35-36页 |
| ·DNA的酶切 | 第36页 |
| ·磷酸化与去磷酸化 | 第36-37页 |
| ·连接 | 第37页 |
| ·连接产物转化 | 第37页 |
| ·DH5α感受态细胞的制备 | 第37页 |
| ·转化 | 第37页 |
| ·SUMO-XsAPRIL在大肠杆菌中的表达与纯化 | 第37-39页 |
| ·将测序正确的连接产物转化入表达菌 | 第37-38页 |
| ·pSUMO-XsAPRIL的诱导表达 | 第38页 |
| ·表达产物SUMO-XsAPRIL的纯化 | 第38-39页 |
| ·Western Blot鉴定纯化的SUMO-XsAPRIL | 第39页 |
| ·重组蛋白的生物学活性检测 | 第39-40页 |
| ·小鼠B、T淋巴细胞及非洲爪蟾淋巴细胞的分离 | 第39页 |
| ·激光共聚焦检测SUMO-XsAPRIL与小鼠B细胞的结合 | 第39-40页 |
| ·WST-8分别检测XsAPRIL对小鼠B淋巴细胞和非洲爪蟾淋巴细胞的作用 | 第40页 |
| ·实验结果与分析 | 第40-46页 |
| ·X1APRIL全长cDNA序列及推测的氨基酸序列 | 第40-41页 |
| ·不同物种种相似性比较及系统进化树分析 | 第41-42页 |
| ·Real-time PCR检测APRIL在各组织中的分布 | 第42-43页 |
| ·重组表达载体SUMO-X1APRIL的构建、表达及纯化鉴定 | 第43-44页 |
| ·重组蛋白SUMO-X1APRIL对小鼠B淋巴细胞的结合 | 第44-45页 |
| ·XsAPRIL蛋白对小鼠B淋巴细胞和非洲爪蟾淋巴细胞的促增殖作用 | 第45-46页 |
| ·讨论 | 第46-48页 |
| 第五章 犬LIGHT和受体HVEM的克隆、表达及其生物学活性研究 | 第48-64页 |
| ·实验材料 | 第48页 |
| ·实验动物、质粒和宿主菌 | 第48页 |
| ·试剂和耗材 | 第48页 |
| ·实验仪器 | 第48页 |
| ·实验方法 | 第48-54页 |
| ·犬LIGHT及其受体HVEM的克隆 | 第48-50页 |
| ·从脾脏中提取总RNA及其逆转录 | 第48页 |
| ·设计引物PCR扩增LIGHT和HVEM | 第48-50页 |
| ·生物信息学分析 | 第50页 |
| ·荧光定量(Real-time)PCR检测LIGHT和HVEM的组织表达 | 第50页 |
| ·各个组织总RNA的提取 | 第50页 |
| ·QPCR引物设计 | 第50页 |
| ·QPCR反应体系 | 第50页 |
| ·LIGHT和HVEM表达载体的构建 | 第50-53页 |
| ·引物设计 | 第50-51页 |
| ·可溶区段的获得 | 第51-52页 |
| ·DNA片段与载体的酶切 | 第52页 |
| ·磷酸化与去磷酸化 | 第52-53页 |
| ·连接 | 第53页 |
| ·连接产物转化 | 第53页 |
| ·DH5α感受态细胞的制备 | 第53页 |
| ·转化 | 第53页 |
| ·重组表达载体在大肠杆菌中的表达与纯化 | 第53-54页 |
| ·将测序正确的连接产物分别转化入表达菌 | 第53-54页 |
| ·重组表达载体的诱导表达 | 第54页 |
| ·蛋白纯化及鉴定 | 第54页 |
| ·重组蛋白dsLIGHT和dsHVEM结合犬T细胞表面 | 第54页 |
| ·犬T淋巴细胞的分离 | 第54页 |
| ·激光共聚焦检测dsLIGHT蛋白和dsHVEM蛋白与T细胞的结合 | 第54页 |
| ·构建LIGHT及其受体HVEM相互作用的3D结合图 | 第54页 |
| ·实验结果与分析 | 第54-62页 |
| ·犬LIGHT及其HVEM的基因结构特点分析 | 第54-56页 |
| ·氨基酸序列的同源比对 | 第56-57页 |
| ·3D结构比对 | 第57-58页 |
| ·荧光定量PCR鉴定基因在各组织中的表达量 | 第58-60页 |
| ·重组蛋白的表达与纯化 | 第60页 |
| ·重组蛋白与犬T淋巴细胞的结合 | 第60-62页 |
| ·构建LIGHT及其受体HVEM相互作用的3D结合图 | 第62页 |
| ·讨论 | 第62-64页 |
| 全文总结 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-69页 |
| 附录：硕士在读期间研究成果 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
