| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-6页 |
| 前言 | 第6-10页 |
| 第一章 B淋巴细胞刺激因子(BAFF)的研究进展 | 第10-15页 |
| ·BAFF的分子结构与表达分布 | 第10-11页 |
| ·BAFF受体的表达分布与结构 | 第11页 |
| ·BAFF介导的信号通路 | 第11-12页 |
| ·BAFF的主要生物学功能 | 第12-13页 |
| ·BAFF对B细胞生长发育的影响 | 第12-13页 |
| ·BAFF对T细胞生长发育的影响 | 第13页 |
| ·BAFF与相关疾病 | 第13-14页 |
| ·BAFF与免疫缺陷 | 第13页 |
| ·BAFF与自身免疫病 | 第13-14页 |
| ·BAFF与恶性肿瘤 | 第14页 |
| ·结论与展望 | 第14-15页 |
| 第二章 LIGHT的研究进展 | 第15-18页 |
| ·LIGHT简介 | 第15页 |
| ·与LIGHT有关的信号通路 | 第15-16页 |
| ·LIGHT的生物学功能 | 第16-17页 |
| ·对T淋巴细胞的作用 | 第16页 |
| ·HVEM依赖的HSV感染的阻断作用 | 第16-17页 |
| ·LIGHT对肿瘤细胞的作用 | 第17页 |
| ·LIGHT相关的免疫疾病 | 第17页 |
| ·结论与展望 | 第17-18页 |
| 第三章 石斑鱼及斑马鱼研究状况 | 第18-20页 |
| ·青石斑鱼的研究 | 第18页 |
| ·斑马鱼的研究 | 第18-20页 |
| 第四章 石斑鱼BAFF的克隆表达 | 第20-42页 |
| ·实验材料 | 第20-21页 |
| ·实验动物、质粒、宿主菌 | 第20页 |
| ·试剂和耗材 | 第20页 |
| ·主要实验仪器 | 第20-21页 |
| ·实验方法 | 第21-29页 |
| ·青石斑鱼BAFF基因的克隆 | 第21-24页 |
| ·从青石斑鱼组织中提取RNA | 第21页 |
| ·设计引物扩增EaBAFF保守片段 | 第21页 |
| ·RACE技术扩增EaBAFF 5’端和3’端 | 第21-24页 |
| ·Real-time PCR检测EaBAFF的组织分布 | 第24页 |
| ·生物信息学分析 | 第24-25页 |
| ·表达载体pET28a-EasBAFF的构建 | 第25-27页 |
| ·引物设计 | 第25页 |
| ·PCR反应 | 第25页 |
| ·酶切 | 第25-26页 |
| ·磷酸化与去磷酸化 | 第26页 |
| ·链接 | 第26-27页 |
| ·连接产物转化 | 第27页 |
| ·重组EasBAFF在大肠杆菌中的表达、鉴定及纯化 | 第27-28页 |
| ·将测序正确的pET28a-EasBAFF质粒转入表达菌E.coliBL21(DE3) | 第27-28页 |
| ·EasBAFF的诱导表达 | 第28页 |
| ·EasBAFF的纯化 | 第28页 |
| ·EasBAFF的Western Blot鉴定 | 第28-29页 |
| ·重组蛋白EasBAFF的活性鉴定 | 第29页 |
| ·细胞制备 | 第29页 |
| ·激光共聚焦检测EasBAFF与B淋巴细胞表面的受体结合 | 第29页 |
| ·WST-8实验 | 第29页 |
| ·实验结果与分析 | 第29-41页 |
| ·青石斑鱼BAFF全长cDNA序列及对应的氨基酸序列 | 第29-30页 |
| ·EaBAFF氨基酸序列的同源比对分析 | 第30-31页 |
| ·蛋白空间结构 | 第31-32页 |
| ·系统进化分析 | 第32-33页 |
| ·EaBAFF在mRNA水平的表达分布 | 第33-34页 |
| ·EaBAFF蛋白基本性质信息学分析 | 第34-36页 |
| ·疏水性分析 | 第36-37页 |
| ·结构功能域分析 | 第37-38页 |
| ·EasBAFF蛋白的表达、纯化及鉴定 | 第38页 |
| ·EasBAFF蛋白与青石斑鱼淋巴细胞和小鼠B淋巴细胞的结合 | 第38-39页 |
| ·EasBAFF蛋白对青石斑鱼淋巴细胞和小鼠B淋巴细胞的促存活作用 | 第39-41页 |
| ·讨论 | 第41-42页 |
| 第五章 斑马鱼LIGHT基因克隆表达 | 第42-59页 |
| ·实验材料 | 第42页 |
| ·实验动物、质粒、宿主菌 | 第42页 |
| ·试剂耗材 | 第42页 |
| ·主要实验仪器 | 第42页 |
| ·实验方法 | 第42-47页 |
| ·斑马鱼LIGHT基因克隆 | 第42-43页 |
| ·从斑马鱼脾脏中提取RNA | 第42-43页 |
| ·通过逆转录和PCR获得zLIGHT | 第43页 |
| ·生物信息学分析 | 第43-44页 |
| ·Real-time PCR检测LIGHT的组织分布 | 第44页 |
| ·表达载体pSUMO-zsLIGHT的构建 | 第44-46页 |
| ·PCR反应 | 第44-45页 |
| ·酶切 | 第45页 |
| ·载体片段去磷酸化,目的基因片段磷酸化 | 第45-46页 |
| ·将目的片段与载体相连 | 第46页 |
| ·连接产物转化 | 第46页 |
| ·SUMO-zsLIGHT在大肠杆菌中的表达、鉴定及纯化 | 第46页 |
| ·重组蛋白SUMO-zsLIGHT活性鉴定 | 第46-47页 |
| ·细胞制备 | 第46页 |
| ·激光共聚焦检测SUMO-zsLIGHT与斑马鱼脾脏淋巴细胞和小鼠T淋巴细胞表面的受体结合 | 第46-47页 |
| ·WST-8实验 | 第47页 |
| ·实验结果与分析 | 第47-58页 |
| ·斑马鱼LIGHT编码区全长cDNA序列及对应的氨基酸序列 | 第47-48页 |
| ·zLIGHT氨基酸序列的同源比对分析 | 第48-49页 |
| ·蛋白空间结构 | 第49-50页 |
| ·系统进化分析 | 第50-51页 |
| ·zLIGHT在mRNA水平的表达分布 | 第51页 |
| ·zLIGHT蛋白基本性质信息学分析 | 第51-54页 |
| ·疏水性分析 | 第54页 |
| ·跨膜区分析 | 第54-56页 |
| ·zLIGHT蛋白的表达、纯化及鉴定 | 第56页 |
| ·SUMO-zsLIGHT蛋白与斑马鱼淋巴细胞和小鼠T淋巴细胞的结合 | 第56-57页 |
| ·SUMO-zsLIGHT对小鼠T细胞的刺激 | 第57-58页 |
| ·讨论 | 第58-59页 |
| 全文总结 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 在读期间发表的学术论文及研究成果 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
