| 中文摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-12页 |
| 第一章 生物制药的简单综述 | 第12-14页 |
| 1 生物类药物的开发历史与国内外趋势 | 第12-13页 |
| ·生物类药的产业化趋势 | 第12页 |
| ·四大生物类药的研究趋势 | 第12-13页 |
| 2 我国生物制药产业面临的挑战 | 第13-14页 |
| 第二章 Ⅱ型可溶重组人肿瘤坏死因子受体sTNFRⅡ的原核表达与分离纯化 | 第14-28页 |
| 1 前言 | 第14-17页 |
| ·人肿瘤坏死因子α(hTNF-α)与Ⅱ型可溶重组人肿瘤坏死因子受体sTNFRⅡ的生物学功能 | 第14-15页 |
| ·蛋白表达系统与sTNFRⅡ仿制药设计思路 | 第15-17页 |
| ·蛋白表达系统的概述 | 第15-16页 |
| ·目的蛋白开发难点 | 第16页 |
| ·目的蛋白设计思路 | 第16-17页 |
| ·本章实验目的 | 第17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-21页 |
| ·材料 | 第17-18页 |
| ·方法 | 第18-21页 |
| ·工程菌的诱导表达及破碎离心 | 第18页 |
| ·目的蛋白的初步纯化 | 第18页 |
| ·目的蛋白层析纯化的条件优化 | 第18-19页 |
| ·对不同上样条件下所得目的蛋白纯度考核 | 第19-21页 |
| 3 结果与讨论 | 第21-28页 |
| ·工程菌的诱导表达及破碎 | 第21-22页 |
| ·目的蛋白的纯化效果 | 第22-26页 |
| ·SDS-PAGE凝胶电泳检测纯化效果 | 第22-23页 |
| ·洗脱峰蛋白质浓度的测定 | 第23-24页 |
| ·洗脱峰浓缩跑胶验证 | 第24-25页 |
| ·洗脱峰纯度高效液相色谱(HPLC)验证 | 第25-26页 |
| ·讨论 | 第26-28页 |
| 第三章 重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)的生产中试 | 第28-41页 |
| 1 前言 | 第28-34页 |
| ·人集落刺激因子与其重组蛋白药物介绍 | 第28-31页 |
| ·hGCSF和rhG-CSF的基因与结构 | 第28-31页 |
| ·GCSF和rhG-CSF生物学作用 | 第31页 |
| ·rhG-CSF制剂的开发进度 | 第31页 |
| ·中试放大生产的意义和标准 | 第31-33页 |
| ·中试放大生产的意义 | 第31-32页 |
| ·GMP与cGMP标准 | 第32页 |
| ·GMP车间洁净度分级依据与消毒方式 | 第32-33页 |
| ·生物药工业生产的设计理念 | 第33页 |
| ·生物药质量检测 | 第33页 |
| ·本章实验目的 | 第33-34页 |
| 2 材料与方法 | 第34-41页 |
| ·rhG-CSF发酵中试 | 第34-36页 |
| ·材料 | 第34页 |
| ·方法 | 第34-36页 |
| ·菌体破碎与包涵体的收集、洗涤及变复性 | 第36-37页 |
| ·材料及中试场所 | 第36页 |
| ·方法 | 第36-37页 |
| ·菌体破碎 | 第36页 |
| ·包涵体的溶解变性 | 第36页 |
| ·包涵体的稀释复性 | 第36-37页 |
| ·阳离子交换层析 | 第37页 |
| ·产品检测 | 第37页 |
| ·结果与讨论 | 第37-41页 |
| ·发酵条件的优化 | 第37-39页 |
| ·中试发酵结果 | 第39-40页 |
| ·APV高压匀浆破碎菌体循环数 | 第40页 |
| ·包涵体的溶解和复性 | 第40页 |
| ·产品收率检测 | 第40-41页 |
| 第四章 恶性疟原虫多表位疫苗M.RCAg-1原核表达与分离纯化 | 第41-51页 |
| 1 前言 | 第41-43页 |
| ·多抗原表位疫苗的研究综述 | 第41页 |
| ·多表位疫苗的优势 | 第41页 |
| ·多表位疫苗的现存缺点 | 第41页 |
| ·恶性疟原虫多表位疫苗M.RCAg-1 | 第41-42页 |
| ·天然构象的312蛋白(M.RCAg-1) | 第41-42页 |
| ·恶性疟原虫多表位疫苗设计的必要性 | 第42页 |
| ·恶性疟原虫多表位疫苗M.RCAg-1的结构特点 | 第42页 |
| ·疫苗纯化的新兴方法 | 第42-43页 |
| ·新型超大孔介质在疫苗等大分子蛋白质纯化中的作用 | 第42页 |
| ·中空纤维膜切向流过滤技术 | 第42-43页 |
| 2 方法 | 第43-46页 |
| ·多表位蛋白疫苗M.RCAg-1的诱导表达及菌体收集 | 第43页 |
| ·重组蛋白的纯化路线 | 第43-46页 |
| 3 结果与讨论 | 第46-51页 |
| ·SDS-PAGE验证表达 | 第46-48页 |
| ·固定化金属螯合层析 | 第48页 |
| ·蛋白原液体积排阻色谱 | 第48-49页 |
| ·还原剂存在下的蛋白原液体积排阻色谱 | 第49-51页 |
| 第五章 总结与展望 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-61页 |
| 附录1 图目录 | 第61-62页 |
| 附录2 表格目录 | 第62-63页 |
| 附录3 常用生化名词缩写 | 第63-64页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 个人简况及联系方式 | 第66-68页 |
