| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 缩略语表 | 第13-14页 |
| 1 文献综述 | 第14-28页 |
| ·植物细胞壁的研究进展 | 第14-17页 |
| ·植物细胞壁的结构 | 第14-16页 |
| ·植物细胞壁的化学组成 | 第16-17页 |
| ·植物细胞壁的作用 | 第17页 |
| ·植物纤维素的研究进展 | 第17-19页 |
| ·植物纤维素的理化性质 | 第17-18页 |
| ·植物纤维素的作用 | 第18页 |
| ·植物纤维素的生物合成 | 第18-19页 |
| ·植物纤维素合酶的研究进展 | 第19-27页 |
| ·植物纤维素合酶的发现 | 第19-20页 |
| ·植物纤维素合酶基因结构特点 | 第20-21页 |
| ·植物纤维素合酶蛋白结构特点 | 第21-22页 |
| ·植物纤维素合酶的表达与调控 | 第22-27页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第27-28页 |
| 2 实验材料与方法 | 第28-51页 |
| ·实验材料 | 第28-29页 |
| ·载体与宿主菌 | 第28页 |
| ·植物材料 | 第28页 |
| ·主要试剂 | 第28-29页 |
| ·仪器设备 | 第29页 |
| ·实验方法 | 第29-51页 |
| ·拟南芥的种植 | 第29-30页 |
| ·营养土种植 | 第29页 |
| ·1/2MS固体培养基种植 | 第29页 |
| ·1/2MS液体培养基种植 | 第29-30页 |
| ·拟南芥纤维素合酶抗体制备 | 第30-36页 |
| ·抗原表位分析 | 第30页 |
| ·引物设计 | 第30页 |
| ·拟南芥叶片总RNA的提取 | 第30页 |
| ·第一链cDNA的合成 | 第30-31页 |
| ·PCR反应 | 第31页 |
| ·PCR产物的胶回收 | 第31-32页 |
| ·目的片段与pGEX-4T-3的连接 | 第32页 |
| ·重组质粒(pGEX-AtCesAs)的转化 | 第32-33页 |
| ·目的片段的测序 | 第33页 |
| ·融合蛋白诱导表达 | 第33页 |
| ·融合蛋白表达和溶解性检测 | 第33-34页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第34页 |
| ·抗体制备 | 第34-35页 |
| ·抗体纯化 | 第35页 |
| ·融合蛋白的凝血酶切割 | 第35页 |
| ·拟南芥原生质膜提取 | 第35-36页 |
| ·Western-blotting分析 | 第36页 |
| ·拟南芥野生型光暗处理 | 第36-39页 |
| ·拟南芥光暗处理过程 | 第36-37页 |
| ·GUS染色 | 第37页 |
| ·光暗处理拟南芥下胚轴长度的变化 | 第37页 |
| ·Real-time引物扩增效率(E)的确定 | 第37-38页 |
| ·拟南芥AtCesAs的基因表达变化 | 第38-39页 |
| ·基因表达差异的分析方法 | 第39页 |
| ·cesa6转录通读鉴定 | 第39-41页 |
| ·突变体总DNA提取 | 第39-40页 |
| ·突变体总RNA提取 | 第40页 |
| ·突变体总RNA的反转录 | 第40页 |
| ·PCR反应 | 第40-41页 |
| ·PCR产物的胶回收 | 第41页 |
| ·AT克隆 | 第41页 |
| ·拟南芥突变体的表型观察 | 第41页 |
| ·光下，突变体表型观察 | 第41页 |
| ·光暗处理下，突变体表型观察及电镜分析 | 第41页 |
| ·拟南芥突变体纤维素合酶基因水平分析 | 第41-42页 |
| ·光暗9天，突变体全植株AtCesAs的基因表达变化 | 第41-42页 |
| ·光下，突变体茎秆AtCesAs的基因表达变化 | 第42页 |
| ·光暗处理下拟南芥突变体纤维素合酶蛋白水平分析 | 第42-44页 |
| ·光暗9天，突变体全植株的纤维素合酶复合体蛋白分析 | 第42-43页 |
| ·光暗9天，突变体纤维素合酶复合体活性分析 | 第43-44页 |
| ·拟南芥突变体成分分析 | 第44-47页 |
| ·细胞壁成分的提取方法 | 第44-46页 |
| ·GCMS测定单糖组成 | 第46页 |
| ·细胞壁成分测定标准曲线的制备 | 第46-47页 |
| ·拟南芥突变体秸秆木质素含量测定 | 第47-48页 |
| ·拟南芥突变体秸秆的降解转化 | 第48页 |
| ·HPLC测定突变体木质素单体组成 | 第48-49页 |
| ·突变体秸秆纤维素聚合度测定 | 第49-50页 |
| ·突变体秸秆纤维素结晶度测定 | 第50-51页 |
| 3 结果与分析 | 第51-90页 |
| ·拟南芥纤维素合酶抗体制备 | 第51-58页 |
| ·AtCESAs抗原表位预测 | 第51-52页 |
| ·表达载体的构建 | 第52-53页 |
| ·融合蛋白表达和溶解性检测 | 第53-55页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第55页 |
| ·多克隆抗体IgG纯化 | 第55页 |
| ·GST-AtCESAs抗体交叉反应检测 | 第55-58页 |
| ·GST-AtCESAs抗体特异性检测 | 第58页 |
| ·拟南芥野生型光暗处理 | 第58-65页 |
| ·GUS染色 | 第58-60页 |
| ·光暗处理拟南芥下胚轴长度的变化 | 第60-61页 |
| ·Real-time引物扩增效率(E)的确定 | 第61-62页 |
| ·拟南芥AtCesAs的表达变化 | 第62-65页 |
| ·光暗处理拟南芥下胚轴的表达变化 | 第62-64页 |
| ·拟南芥不同组织的表达变化 | 第64-65页 |
| ·cesa6转录通读鉴定 | 第65-68页 |
| ·cesa6突变体纯合确定 | 第65页 |
| ·cesa6突变体3'-cDNA转录鉴定 | 第65页 |
| ·cesa6转录通读的鉴定 | 第65-68页 |
| ·cesa6转录通读后T-DNA的变化 | 第68页 |
| ·拟南芥突变体表型观察 | 第68-75页 |
| ·光下，AtCesA6突变体表型观察 | 第68-70页 |
| ·光暗处理下，AtCesA6突变体表型观察及电镜分析 | 第70-71页 |
| ·光下，突变体表型观察 | 第71-73页 |
| ·光下，突变体茎秆的电镜切片 | 第73-75页 |
| ·拟南芥突变体纤维素合酶基因表达变化 | 第75-77页 |
| ·光暗9天，突变体全植株AtCesAs的表达变化 | 第75-77页 |
| ·光下，突变体茎秆AtCesAs的表达变化 | 第77页 |
| ·光暗处理下拟南芥突变体纤维素合酶蛋白水平分析 | 第77-82页 |
| ·光暗9天，突变体全植株AtCESAs的表达变化 | 第77-80页 |
| ·光暗9天，突变体纤维素合酶活性分析 | 第80-82页 |
| ·拟南芥突变体成分分析 | 第82-86页 |
| ·光暗9天，AtCesA6突变体全植株成分分析 | 第82-83页 |
| ·突变体秸秆成分分析 | 第83-84页 |
| ·突变体半纤维素单糖组成分析 | 第84-85页 |
| ·突变体果胶质单体组成分析 | 第85-86页 |
| ·突变体秸秆木质素单体组成分析 | 第86页 |
| ·突变体秸秆纤维素结构特性分析 | 第86-87页 |
| ·突变体秸秆的降解转化 | 第87-90页 |
| 4 讨论 | 第90-97页 |
| ·抗体的制备 | 第90-91页 |
| ·拟南芥的光暗处理 | 第91页 |
| ·转录通读现象 | 第91-92页 |
| ·突变体表型 | 第92-93页 |
| ·AtCESA2、AtCESA5对AtCESA6的功能冗余作用 | 第93-95页 |
| ·AtCesA6突变后对次生壁的影响 | 第95-96页 |
| ·总结与展望 | 第96-97页 |
| 参考文献 | 第97-104页 |
| 附录 | 第104-114页 |
| 致谢 | 第114页 |
