| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 目录 | 第10-14页 |
| 缩略词表 | 第14-16页 |
| 前言 | 第16-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-35页 |
| 1.Leptin及其受体基因的发现及相关研究 | 第17-28页 |
| ·Leptin基因的发现 | 第17页 |
| ·Leptin受体基因的发现 | 第17-18页 |
| ·Leptin及其受体分子调控通路研究 | 第18-25页 |
| ·Leptin及其受体介导的的JAK/STAT信号通路研究进展 | 第19-21页 |
| ·Leptin及其受体介导的SOCS3信号通路研究进展 | 第21-23页 |
| ·Leptin及其受体介导的AMPK信号转导途径 | 第23-25页 |
| ·Leptin主要代谢通路研究小结 | 第25页 |
| ·Leptin及其受体的生物学功能研究相关进展 | 第25-28页 |
| ·Leptin及其受体与生长发育 | 第25-26页 |
| ·Leptin对生殖相关激素的影响 | 第26页 |
| ·Leptin与青春期启动的关联 | 第26-27页 |
| ·Leptin对妊娠的调控作用 | 第27页 |
| ·Leptin与免疫之间的关系 | 第27-28页 |
| ·Leptin及其受体其它生物学功能小结 | 第28页 |
| 2.家禽Leptin及受体相关研究进展 | 第28-31页 |
| ·家禽Leptin基因研究与争议 | 第28-31页 |
| ·家禽Leptin争议的由来 | 第28-30页 |
| ·外源Leptin对家禽的影响 | 第30-31页 |
| ·家禽Leptin受体基因功能研究 | 第31页 |
| ·家禽Leptin及其受体研究综述小结 | 第31页 |
| 3.转基因鸡研究进展 | 第31-35页 |
| ·转基因鸡制备技术进展 | 第31-33页 |
| ·显微注射法 | 第32页 |
| ·逆转录病毒载体法 | 第32页 |
| ·胚胎干细胞法 | 第32-33页 |
| ·原生殖细胞(PGCs)转染法 | 第33页 |
| ·雄性生殖细胞载体法 | 第33页 |
| ·RNAi技术在转基因家禽上的应用 | 第33-35页 |
| ·RNAi技术同转基因技术的结合过程 | 第33-34页 |
| ·RNAi技术应用于转基因家禽 | 第34-35页 |
| 第二章 鸡Leptin序列克隆的验证及LEPR组织表达谱分析 | 第35-44页 |
| 1.材料和方法 | 第35-40页 |
| ·实验材料 | 第35-37页 |
| ·实验动物 | 第35页 |
| ·实验主要仪器 | 第35-36页 |
| ·主要试剂及配方 | 第36-37页 |
| ·实验方法 | 第37-40页 |
| ·基因组DNA提取 | 第37页 |
| ·组织RNA提取 | 第37-38页 |
| ·PCR引物设计 | 第38页 |
| ·PCR扩增程序 | 第38-39页 |
| ·PCR引物设计与扩增 | 第39页 |
| ·实时定量PCR数据分析 | 第39-40页 |
| 2.结果与分析 | 第40-41页 |
| ·DNA及组织RNA提取结果 | 第40页 |
| ·Leptin基因PCR扩增结果 | 第40页 |
| ·LEPR荧光定量结果 | 第40-41页 |
| 3.讨论 | 第41-44页 |
| ·鸡Leptin基因存在的争议 | 第41-42页 |
| ·鸡LEPR基因的组织表达谱分析 | 第42-44页 |
| 第三章 RNAi验证LEPR在鸡前脂肪细胞中的功能及代谢通路变化 | 第44-67页 |
| 1.材料与方法 | 第45-51页 |
| ·实验材料 | 第45-46页 |
| ·实验动物 | 第45页 |
| ·实验仪器 | 第45页 |
| ·主要试剂、抗体及配方 | 第45-46页 |
| ·实验方法 | 第46-51页 |
| ·细胞的分离与培养 | 第46页 |
| ·细胞的冻存复苏 | 第46-47页 |
| ·shRNA干扰片段设计 | 第47页 |
| ·载体PLLU2G-shLEPR的构建 | 第47-49页 |
| ·质粒提取 | 第49页 |
| ·脂质体转染鸡前脂肪细胞 | 第49-50页 |
| ·细胞RNA的提取、反转录 | 第50页 |
| ·荧光定量PCR分析 | 第50-51页 |
| ·鸡前脂肪细胞的诱导分化 | 第51页 |
| 2.结果与分析 | 第51-62页 |
| ·鸡前体脂肪细胞培养结果 | 第51-52页 |
| ·RNAi质粒载体的构建 | 第52-55页 |
| ·用XhoⅠ和HpaⅠ酶切PLLU2G骨架载体 | 第52页 |
| ·菌落PCR鉴定PLLU2G-shLEPR图谱 | 第52-55页 |
| ·载体测序结果 | 第55页 |
| ·shLEPR质粒转染鸡前脂肪细胞的荧光检测结果 | 第55-56页 |
| ·质粒干扰效率检测 | 第56-58页 |
| ·转染后细胞RNA提取结果 | 第56页 |
| ·反转录后内参基因检测 | 第56-57页 |
| ·待测基因的PCR扩增结果琼脂糖凝胶电泳检测 | 第57页 |
| ·荧光定量溶解曲线检测 | 第57页 |
| ·荧光定量PCR的干扰效率检测结果 | 第57-58页 |
| ·RNAi处理后各基因表达量分析 | 第58-61页 |
| ·RNAi处理后基因表达量初步统计 | 第58页 |
| ·RNAi处理基因表达量分析 | 第58-61页 |
| ·RNAi处理后对细胞增殖速度的影响 | 第61-62页 |
| 3.讨论 | 第62-67页 |
| ·鸡前脂肪细胞培养与诱导分化 | 第62-63页 |
| ·鸡前脂肪细胞培养及诱导分化体系的建立 | 第62页 |
| ·不同shLEPR组别细胞增殖结果 | 第62-63页 |
| ·RNAi干扰后各基因表达量变化 | 第63-66页 |
| ·shLERR干扰效率分析 | 第63页 |
| ·shLEPR干扰后相关基因表达分析 | 第63-66页 |
| ·shLEPR干扰前脂肪细胞研究小结 | 第66-67页 |
| 第四章 不同饲养条件下LEPR及其代谢通路基因表达变化分析 | 第67-75页 |
| 1.材料与方法 | 第67-69页 |
| ·实验材料 | 第67-68页 |
| ·实验动物 | 第67页 |
| ·实验仪器 | 第67页 |
| ·实验试剂及配置 | 第67-68页 |
| ·实验方法 | 第68-69页 |
| ·实验用鸡的饲养分组与饲养方式 | 第68页 |
| ·组织RNA的提取及反转录 | 第68页 |
| ·荧光定量检测基因表达量 | 第68-69页 |
| 2.结果与分析 | 第69-71页 |
| ·体重测定结果 | 第69页 |
| ·禁食及正常饲喂组荧光定量差异分析实验结果 | 第69-71页 |
| ·荧光定量数据 | 第69-70页 |
| ·各基因表达柱状图分析 | 第70-71页 |
| 3.讨论 | 第71-75页 |
| ·禁食3天对体重增加的调整 | 第71-72页 |
| ·禁食及正常饲喂组荧光定量差异分析 | 第72-74页 |
| ·STAT3和NPY基因表达变化 | 第72-73页 |
| ·AdipoR2基因和CPT-1基因表达变化 | 第73页 |
| ·LEPR基因表达变化综合分析 | 第73-74页 |
| ·禁食对LEPR等基因影响研究小结 | 第74-75页 |
| 第五章 shLEPR转基因鸡的构建及相关检测 | 第75-91页 |
| 1.材料与方法 | 第75-80页 |
| ·实验材料 | 第75-77页 |
| ·实验动物 | 第75页 |
| ·实验仪器 | 第75页 |
| ·实验试剂及配置 | 第75-77页 |
| ·实验方法 | 第77-80页 |
| ·shLEPR转染用种蛋的处理 | 第77页 |
| ·转基因个体绿色荧光蛋白观测 | 第77-78页 |
| ·转基因个体基因组PCR检测 | 第78页 |
| ·转基因个体Western-blot鉴定 | 第78-80页 |
| ·转基因个体体重、体尺测量及相关器官重量测量 | 第80页 |
| ·转基因个体相关基因表达量检测 | 第80页 |
| 2.结果及分析 | 第80-88页 |
| ·shLEPR转基因测定 | 第80-84页 |
| ·孵化率统计 | 第80-81页 |
| ·荧光信号检测 | 第81-82页 |
| ·转基因结果分子检测 | 第82-84页 |
| ·shLEPR转基因结果分析 | 第84-88页 |
| ·转基因个体表型性状结果与分析 | 第84-86页 |
| ·转基因个体相关通路基因表达变化 | 第86-88页 |
| 3.讨论 | 第88-91页 |
| ·shLEPR转基因效果讨论 | 第88-89页 |
| ·胚盘下腔注射效果分析 | 第88-89页 |
| ·转基因结果检测与分析 | 第89页 |
| ·LEPR干扰后个体表型及基因通路变化分析 | 第89-90页 |
| ·LEPR基因表达及表型分析 | 第89-90页 |
| ·相关基因表达量分析 | 第90页 |
| ·shLEPR转基因讨论小结 | 第90-91页 |
| 全文结论及创新点 | 第91-92页 |
| 全文结论 | 第91页 |
| 创新点 | 第91-92页 |
| 参考文献 | 第92-107页 |
| 附表 | 第107-110页 |
| 附表1 干扰质粒载体测序结果 | 第107-110页 |
| 作者简介 | 第110-112页 |
| 致谢 | 第112-113页 |
| 导师评阅表 | 第113页 |
